[發明專利]對癌癥的代理功能性診斷測試

在審

• 申請號: 202010528293.6
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN111856013A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: W.皮爾塞爾;M.H.卡多恩
• 申請（專利權）人: 尤特羅皮克斯制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 曹立莉

1.一種或多種BH3結構域肽在制備用于確定患者的癌癥治療的藥物中的用途，包括：

為患者的腫瘤或癌細胞的樣品確定BH3分布；

確定一個或一個以上的患者的臨床因素，和

為患者對一個或多個癌癥治療的臨床反應的可能性分類；

其中選擇一個或多個臨床因素以增加與臨床反應有關系的BH3分布的特異性和/或敏感性。

2.權利要求1的用途，其中所述癌癥選自急性髓系白血病(AML)，多發性骨髓瘤，濾泡性淋巴瘤，急性成淋巴細胞白血病(ALL)，慢性淋巴細胞白血病，和非霍奇金淋巴瘤。

3.權利要求1的用途，其中所述癌癥是實體腫瘤。

4.權利要求1的用途，其中所述癌癥治療是BH3模擬物、表觀遺傳修飾劑、拓撲異構酶抑制劑、細胞周期調控的調節劑、和驅動蛋白紡錘體蛋白穩定劑中的一種或多種。

5.權利要求4的用途，其中所述細胞周期調控的調節劑為細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑。

6.權利要求1的用途，其中BH3分布分析包括：使患者的癌細胞滲透化，在滲透化細胞與一個或多個BH3結構域肽接觸時測定線粒體膜電位的變化；和找出線粒體膜電位的損失與細胞對誘導凋亡化療劑的化學敏感性的相關性。

7.一種為患者的癌癥治療定位的方法，包括：

將患者的滲透化的癌細胞和一個或多個BH3區域肽相接觸；

通過免疫組織化學法和/或熒光原位雜化法(FISH)，確定患者癌細胞的一個或多個臨床因素存在與否；以及

為患者對一種或多種癌治療有臨床反應的可能性作出級別分類。

8.一種為確定AML患者對阿糖胞苷和/或阿扎胞苷的反應的方法，包括：

確定患者的AML癌細胞標本的BH3分布；

確定患者的一種或多種臨床因素，和

其中從年齡分布和/或細胞基因狀態中選出一種或多種臨床因素；和

為患者對一種或幾種癌癥治療有臨床反應的可能性作出級別分類。

9.權利要求8的方法，其中確定BH3分布包括把患者的AML癌細胞標本與BIM接觸。

10.BH3分布測試分析的方法，包括以下步驟：

將Ficoll純化的，活的冷凍的,預處理的AML標本解凍，與美國加州Miltenyi生物技術公司的FCR的阻斷劑一起再懸浮在FACS緩沖液中，所述FACS緩沖液包含1％胎牛血清的細胞、2mM EDTA和PBS，在冰上10分鐘，然后再用美國加州BD生物科學公司的抗體CD45-V450、美國加州BD生物科學的CD3-生物素和美國加州e生物科學公司的CD20-生物素染色，在冰上20分鐘；

將樣品與美國加州BD生物科學公司的二級抗體鏈霉親和素-APC一起重新懸浮在FACS緩沖液里，在冰上20分鐘；染色后，AML標本用美國密蘇里州Sigma-Aldrich公司的毛地黃皂苷滲透化，然后每管2x 10⁵個細胞在室溫下，在Newmeyer緩沖液里，與肽、或1％二甲基亞砜、或10μM羰基氰化物間氯苯腙孵育180分鐘，所述Newmeyer緩沖液包含80mM KCl、10mMHEPES、40μM EDTA、40μM EGTA、5mM琥珀酸、300mM海藻糖、0.1％牛血清白蛋白且pH 7.4，所述肽為BIM 100μM、BIM 0.1μM、PUMA 100μM、PUMA 10μM、NOXA 100μM、BAD 100μM、BMF 100μM、HRK 100μM、或PUMA2A 100μM；

除非活細胞不足的情況以外，樣品一式兩份重復作實驗；

作分析實驗45分鐘之前加入美國紐約州Enzo生命科學公司的電位JC-1線粒體染料。