[發明專利]一種稻曲菌素A純品的制備方法

在審

• 申請號: 202010528143.5
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111763241A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 王剛;徐劍宏;史建榮;滿惠子
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C07K5/107
• 分類號: C07K5/107;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/36;C07K1/14
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 王巍巍

本申請公開了一種稻曲菌素A純品的制備方法，涉及農產品安全檢測技術領域，具體包括：取稻曲球粉末或稻綠核菌培養物粉末，加入提取液進行超聲提取，過濾，得到稻曲菌素A粗提取液；調節稻曲菌素A粗提取液的pH，再采用大孔吸附樹脂柱進行柱層析，收集洗脫液；將含有稻曲菌素A的洗脫液旋轉蒸發，再用高速逆流色譜分離純化，收集洗脫液；選擇只含有稻曲菌素A的洗脫液進行合并后旋轉蒸干，再溶于水中，冷凍干燥，即制得稻曲菌素A純品。本申請解決了稻曲菌素A純品分離純化成本高的問題，提高了單次制備量，并降低了分離純化成本。

技術領域

本申請涉及農產品安全檢測技術領域，具體涉及一種稻曲菌素A純品的制備方法。

背景技術

稻曲病是一種常發于水稻穗部的真菌病害，其致病真菌為稻綠核菌。稻曲病菌侵染水稻穗部形成黃色或黑色稻曲球，該病害可使孕穗期谷粒營養運輸受阻，不能正常發育，造成空秕率升高，千粒重下降，影響水稻產量。稻綠核菌在侵染水稻后會產生稻曲菌素，導致稻米作物受毒素污染；全球每年約有25％的水稻作物會受到稻曲菌素污染，造成很大的經濟損失與安全風險。目前已發現共計7種稻曲菌素，分別為稻曲菌素A，B，C，D，E，F與稻曲菌素G，其共同的特征母核為一個經由醚鍵連接而成的十三元環縮肽，其中稻曲菌素A(Ustiloxin A，化學結構式見式1)是最主要的一類污染物，其含量占所有稻曲菌素污染物含量80％以上。

稻曲菌素A可以抑制真核細胞中有絲分裂過程，稻曲菌素A對有絲分裂過程的半數抑制濃度(IC₅₀)為0.7μmol/L，與秋水仙堿相當，因此稻曲菌素A具有很強的細胞毒性與植物毒性。實驗表明稻曲菌素A對人的胃、肺、乳腺、結腸和腎細胞系的生長分離均有抑制作用。當家豬被飼喂受稻曲菌素A污染的稻米時將出現中毒反應，表現為：肉豬生長減慢，增重速率降低；多種內臟器官病變，病變較為明顯的有肝、腎和脾；影響母豬的生殖性能，除卵巢出現充血、出血外，產仔數、初生窩重、斷奶窩重及仔豬成活率均下降，同時還出現產死胎、干尸胎及畸形胎等情況。除此之外，稻曲菌素A還將導致作物種子出芽率顯著下降，影響后茬作物的產量。

鑒于稻曲菌素A污染的普遍性和危害性，針對它的污染風險評估、毒理研究以及控制方法開發等受到業界的廣泛關注，對于純化的稻曲菌素A毒素純品的需求很大。然而目前全球尚無商品化稻曲菌素A標準品在售，且常用的分離純化方法需要用到反相硅膠填料與Sephadex葡聚糖凝膠，成本高昂，嚴重限制了其廣泛應用。因此亟需開發一種能夠大規模、安全高效、廉價的稻曲菌素A制備純化技術。

發明內容

本申請實施例通過提供一種稻曲菌素A純品的制備方法，解決了現有稻曲菌素A純品分離純化成本高的問題，提高了稻曲菌素A純品的單次制備量，并降低了分離純化成本。

為達到上述目的，本申請主要提供如下技術方案：

本申請提供了一種稻曲菌素A純品的制備方法，包括以下步驟：

(1)取稻曲球粉末或稻綠核菌培養物粉末，加入提取液進行超聲提取，過濾，收集濾液得到稻曲菌素A粗提取液；

(2)調節稻曲菌素A粗提取液的pH，再采用大孔吸附樹脂柱對稻曲菌素A粗提取液進行柱層析，收集洗脫液；

(3)將含有稻曲菌素A的洗脫液旋轉蒸發，再用高速逆流色譜分離純化，收集洗脫液；

(4)將含有稻曲菌素A的洗脫液旋轉蒸干，再溶于水中，冷凍干燥，即制得稻曲菌素A純品。

作為優選，所述提取液為含有體積分數為1.0％的甲酸和體積分數為0.1％的吐溫-20的水溶液。

作為優選，所述超聲提取采用的料液比為1/5-1/20。

作為優選，所述步驟(1)中采用低速或中速濾紙過濾。

作為優選，所述步驟(2)中調節稻曲菌素A粗提取液的pH至中性。