[發(fā)明專利]釓離子-聚乙二醇-樹狀大分子-CD68抗體聚合物及其制備方法與應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010525997.8
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN111763326A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發(fā)明（設計）人: 秦健;李江;李長勤;朱建忠;楊慧;姚倩倩;鄭修竹
• 申請（專利權）人: 山東第一醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院
• 主分類號: C08G81/00
• 分類號: C08G81/00;C08G83/00;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種釓離子?聚乙二醇?樹狀大分子?CD68抗體聚合物，結構式如式I所示，該聚合物的制備方法為：以二甲亞砜溶液與1，4，7，10?四氮雜環(huán)十二烷?1，4，7，10?四乙酸?N?羥基琥珀酰亞胺酯反應，得樹狀大分子溶液；以CD68?PEG?COOH、二甲亞砜溶液中和樹狀大分子溶液，反應得溶液a；向溶液a中加入羧基化聚乙二醇，得溶液b；向溶液b中加入氯金酸溶液，得溶液c；向溶液c中加入NaBH₄溶液，得溶液d；向溶液d中加入三乙胺，隨后加入乙酸酐，得反應產物；將反應產物進行透析，并將透析的產物冷凍干燥得到聚合物Gd?PEG?G5.0?CD68抗體聚合物。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，更具體地說是涉及一種釓離子-聚乙二醇-樹狀大分子-CD68抗體聚合物的制備方法。

背景技術

AS病變幾乎全部累及雙側骶髂關節(jié)(sacroiliac joint，SIJ)。以往研究認為其基礎病理特點為SIJ附著點炎。隨著附著點的炎癥侵蝕，進而導致炎癥修復過程中新骨形成及非特異性軟骨內骨化，最終導致關節(jié)強直。早期SIJ炎病理改變以滑膜炎為主要特點，其主要表現為滑膜襯里細胞層增厚，疏松結締組織少量淋巴細胞、漿細胞及大量巨噬細胞浸潤，血管翳形成。

在健康狀態(tài)下，巨噬細胞是關節(jié)滑膜組織中重要的常駐細胞類型之一。當關節(jié)發(fā)生炎癥時，在軟骨面-血管翳連接處的亞襯里層和襯里層被激活并迅速增殖，可達細胞含量的30％-40％。與靜止的相比，活化的可產生大量促炎細胞因子(如腫瘤壞死因子-α、IL-6、白細胞介素-1β、白細胞介素-23)、趨化因子(如MCP-1)和酶(COX-2、iNOS和MMPs)，從而驅動炎癥反應和關節(jié)破壞。CD68受體是87-115kDa的高度糖基化的跨膜蛋白，其在的表面上高度特異性表達。作為負責攝取氧化LDL的候選受體，CD68受體在活化后增加，且滑膜的侵蝕性、血管翳內的浸潤活性和疾病的活動與CD68的表達密切相關。因此，靶向CD68受體是檢測滑膜巨噬細胞的有效方法。

然而，現有技術中，關于CD68受體的檢測主要是通過有創(chuàng)手段獲取局部標本后，在體外進行免疫組織化學法進行檢測，看不到滑膜內浸潤影像，并且不能對滑膜進行定位。

因此，如何提供一種可以對CD68受體進行檢測且可實現對滑膜內巨噬細胞定位的化合物本領域技術人員亟需解決的技術問題。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種釓離子-聚乙二醇-樹狀大分子-CD68抗體聚合物，該聚合物使得滑膜內巨噬細胞浸潤影像可視化成為可能。

為了實現上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

一種釓離子-聚乙二醇-樹狀大分子-CD68抗體聚合物的制備方法，包括如下步驟：

1)向裝有二甲亞砜溶液的容器中邊攪拌邊加入1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯，反應20-25h，得樹狀大分子溶液；

2)將CD68-PEG-COOH溶解在二甲亞砜溶液中，隨后逐滴加入所述樹狀大分子溶液，反應64-76h，得溶液a；

3)向所述溶液a中加入羧基化聚乙二醇，反應64-78h，得溶液b；

4)向所述溶液b中加入氯金酸溶液，室溫攪拌反應25-35min，得溶液c；

5)向所述溶液c中加入NaBH₄溶液，室溫攪拌反應1-4h，然后逐滴加入Gd(NO₃)₃溶液反應20-26h，得溶液d；

6)向所述溶液d中加入三乙胺，攪拌混合22-32min，隨后加入乙酸酐，室溫攪拌反應18-28h，得反應產物；

7)將反應產物進行透析，并將透析的產物冷凍干燥得到聚合物Gd-PEG-G5.0-CD68抗體聚合物。