[發明專利]氣相色譜-質譜聯用法檢測食品中9種膽固醇氧化物的方法

有效

• 申請號: 202010525745.5
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN113295806B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 楊俊;吳軒民;張協光
• 申請（專利權）人: 深圳深檢集團醫學檢驗實驗室
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 張換君

1.氣相色譜-質譜聯用法檢測食品中9種膽固醇氧化物的方法，其特征在于，所述方法為：

S1:樣品脂類提?。簻蚀_稱取2.0g均質粉碎的樣品于三角瓶中，加入2μg19-羥基膽固醇作為內標物，加入150ml體積比為2：1的三氯甲烷、甲醇為提取劑，充分震蕩2min，然后超聲30min；置于4℃環境中過夜，靜置分層，再用濾紙過濾，獲得濾液，氮氣吹干，得到脂類提取物；

S2:皂化：向得到的脂類提取物中加入10mL濃度為1mol/L的KOH溶液，10mL甲醇，充分震蕩，超聲5min，使脂類提取物混合溶解，室溫下靜置皂化10h，然后用10mL去離子水轉移至分液漏斗中，再用10mL乙酸乙酯重復萃取3次，移取上層溶液，再用10mL去離子水沖洗萃取液；然后，經無水硫酸鈉脫水在濾紙上過濾，除去水分；再用10mL乙酸乙酯沖洗一遍，獲得濾液，旋轉蒸發儀上濃縮至近干；

S3:凈化濃縮：向得到的皂化后的提取物中加入3mL正己烷，充分震蕩溶解，然后緩慢加入到已活化的NH₂-SPE中，依次用10mL體積比為95:5的正己烷、乙酸乙酯，和10mL體積比為90:10的正己烷、乙酸乙酯洗柱，棄掉廢液，最后用5mL丙酮洗柱，收集濾液，氮氣吹干；

S4:衍生化：加入100μL的N,O-雙(三甲基硅烷)三氟乙酰胺BSTFA，60℃下，衍生40min，衍生結束之后，用氮氣吹干，用1.0mL正己烷溶解定容，上機測試；

S5:取濃度為0.2μg/mL的9種膽固醇氧化物混合標準溶液，在氣相色譜條件和質譜條件下分別對其進行檢測，以9種膽固醇氧化物的定量離子峰面積與19-羥基膽固醇的定量離子峰面積的比值為縱坐標，以9種膽固醇氧化物工作液濃度19-羥基膽固醇的濃度的比值為橫坐標，繪制標準曲線，標準曲線的線性回歸方程如表1所示：

表1

式中x為對應膽固醇氧化物的濃度，單位μg/mL，y為峰面積，R²為相關系數；

S6:樣品前處理之后在氣相色譜條件和質譜條件下進行檢測，按照以下公式(1)計算樣品中9種膽固醇氧化物的含量；

X＝ρ×V/m?(1)；

式中：X為樣品中膽固醇氧化物的含量，單位為mg/kg；ρ為從線性回歸方程中得到的膽固醇氧化物濃度，單位為μg/mL；V為樣品定容體積，單位為mL；M為樣品質量，單位為g；

所述氣相色譜條件為：

色譜柱：DB-5ms?30m×0.25mm×0.25μm；柱溫升溫程序：初始溫度150℃保持2min，以20℃/min升溫至300℃，保持20min；進樣口溫度：280℃；進樣模式：不分流；進樣量：1.0μL；載氣：氦氣；

所述質譜條件為：

離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；傳輸線溫度：250℃；電離方式：電子轟擊離子源；電子能量：70eV；電子倍增器電壓：1632V；采集模式：選擇離子掃描模式；掃描質量范圍：m/z?50～550；溶劑延遲：8min。