[發(fā)明專利]一種檢測人新型冠狀病毒IgM抗體的試紙條、試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010525652.2
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN111537748B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張志棟;解巧麗;齊凱歌;陳志龍
• 申請（專利權(quán)）人: 生物島實驗室;廣州恩寶生物醫(yī)藥科技有限公司;中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/533;G01N33/531
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測人新型冠狀病毒IgM抗體的試紙條，其特征在于，所述試紙條的硝酸纖維素膜設(shè)有檢測線和質(zhì)控線，所述檢測線包被新型冠狀病毒核衣殼蛋白和S1蛋白，所述質(zhì)控線包被雞IgY抗體；

所述試紙條的結(jié)合墊上包被有量子點標記的羊抗人IgM抗體和量子點標記的羊抗雞IgY抗體；

所述核衣殼蛋白的工作濃度為0.1～0.5mg/mL；

所述S1蛋白的工作濃度為1.5～2mg/mL；

所述S1蛋白與所述核衣殼蛋白以7:1的比例混合；

樣品墊制備時使用的樣品墊處理液為含有質(zhì)量分數(shù)為0.3～0.5％BSA的Tris-HCl緩沖液；

所述結(jié)合墊制備時使用的結(jié)合墊處理液為含有質(zhì)量分數(shù)為1～3％的海藻糖、0.5～1.5％的酪蛋白鈉和0.3～0.8％NaCl的Tris-HCl緩沖液；

所述試紙條包括順次搭接的樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，

所述核衣殼蛋白的工作濃度為0.25mg/mL；

所述S1蛋白的工作濃度為1.75mg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，

所述雞IgY抗體的工作濃度為0.8～1.2mg/mL；

稀釋所述新型冠狀病毒核衣殼蛋白、S1蛋白和雞IgY抗體時使用的溶液為包被稀釋液，所述包被稀釋液為含有質(zhì)量分數(shù)為1～3％蔗糖的PBS緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條，其特征在于，

所述雞IgY抗體的工作濃度為1mg/mL；

所述包被稀釋液為含有質(zhì)量分數(shù)為2％蔗糖的PBS緩沖液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，

所述質(zhì)控線位于硝酸纖維素膜上靠近吸水墊的一端，與吸水墊的距離為8～12mm；

所述檢測線位于硝酸纖維素膜上靠近結(jié)合墊的一端，與結(jié)合墊的距離為8～12mm。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試紙條，其特征在于，

所述結(jié)合墊上羊抗人IgM抗體和羊抗雞IgY抗體的濃度比為(20～30):1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項所述的試紙條，其特征在于，所述羊抗人IgM抗體的標記方法為：將活化的量子點微球與所述羊抗人IgM抗體混合反應，所述量子點微球與抗體共價偶連，得到量子點標記的羊抗人IgM抗體；

所述羊抗人IgM抗體與量子點微球的質(zhì)量比為(1～1.5):10；

所述量子點微球的粒徑為80～120nm；

所述混合反應的溫度為18～26℃；

所述活化使用的活化劑包括Sulfo-NHS和EDC；

所述Sulfo-NHS的質(zhì)量濃度為10～30mg/mL；

所述EDC的質(zhì)量濃度為10～30mg/mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試紙條，其特征在于，

所述Sulfo-NHS的質(zhì)量濃度為20mg/mL；

所述EDC的質(zhì)量濃度為20mg/mL。

9.一種如權(quán)利要求1～8任一項所述的試紙條的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

(1)制備量子點標記的羊抗人IgM抗體和量子點標記的羊抗雞IgY抗體，再將所述標記后的抗體混合后噴膜得到結(jié)合墊；

(2)將雞IgY抗體稀釋后劃線到硝酸纖維素膜上形成質(zhì)控線，將新型冠狀病毒核衣殼蛋白和S1蛋白稀釋后劃線到所述硝酸纖維素膜上形成檢測線；

(3)將吸水墊、硝酸纖維素膜、結(jié)合墊和樣品墊依次固定于底板上得到所述試紙條。