[發明專利]一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的培養基及方法

在審

• 申請號: 202010525159.0
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN111448992A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 王凱;余光潤;王建勇;苗麗
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 劉曉明

1.一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的培養基，其特征在于，包括MS基本培養基、FPX、CuSO₄。

2.如權利要求1所述的一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的培養基，其特征在于，所述FPX的濃度為45-100uM。

3.如權利要求1所述的一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的培養基，其特征在于，所述CuSO₄的濃度為0.6mg/L。

4.如權利要求1所述的一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的培養基，其特征在于，所述45-100uM FPX的配制方法為：388.84mg溶于5mL DMSO溶液，攪拌溶解后，用蒸餾水補至10mL，得到100mM FPX母液，取450ul-1ml的100mM FPX母液加到1L培養基中得到45-100uM的FPX。

5.如權利要求1所述的一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的培養基，其特征在于，所述0.6mg/mL CuSO4的配制方法為：將50mg CuSO₄·5H2O溶解到50mL的蒸餾水中，得到1mg/mL CuSO₄，4℃黑暗保存，取600ul 1mg/mL CuSO₄到1L的培養基中配制成終濃度為0.6mg/L的CuSO₄。

6.如權利要求1所述的一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的培養基，其特征在于，所述培養基的配制方法：4.43g MS粉末和30g蔗糖溶于1L去離子水，添加3gPhytagel，攪拌均勻，用1M KOH調整pH為5.8；121℃高壓滅菌15min；滅菌完成后，取出培養基，待培養基冷卻后，添加45-100uM FPX，搖勻后，無菌條件下分裝培養基至培養皿中，每個培養皿25ml培養基，培養基凝固后，封口膜包裹培養皿，4℃黑暗保存。

7.一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)超凈工作臺中，用鑷子去除二穗短柄草種子上的外稃，置于50mL離心管中，用20mL75％乙醇將種子表面滅菌30s，無菌去離子水沖洗三次，再加入20mL的6.25％次氯酸鈉溶液，上下顛倒混勻，消毒15分鐘，用無菌去離子水沖洗3-6次，得到滅菌后的種子；

(2)將滅菌后的種子用外科手術刀切割，切除部分胚乳，保留切割后含胚的部分，將切割后的種子置于無菌濾紙上吸去表面水分；

(3)將吸干表面水分的種子放置到培養基上，胚朝上，培養皿置于黑暗條件下培養，培養三天后即出現愈傷組織。

8.如權利要求1所述的一種快速誘導二穗短柄草種子產生愈傷組織的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述培養條件為溫度26-30℃，濕度50％-70％。