[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)人新型冠狀病毒IgG抗體的試紙條、試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010524951.4
• 申請(qǐng)日: 2020-06-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111537747B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志棟;解巧麗;齊凱歌;陳志龍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 生物島實(shí)驗(yàn)室;廣州恩寶生物醫(yī)藥科技有限公司;中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/531;G01N33/533
• 代理公司: 北京品源專(zhuān)利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測(cè)人新型冠狀病毒IgG抗體的試紙條，其特征在于，所述試紙條的硝酸纖維素膜設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述檢測(cè)線包被新型冠狀病毒核衣殼蛋白和S1蛋白，所述質(zhì)控線包被雞IgY抗體；

所述試紙條的結(jié)合墊上包被有量子點(diǎn)標(biāo)記的羊抗人IgG抗體和量子點(diǎn)標(biāo)記的羊抗雞IgY抗體；

所述核衣殼蛋白的工作濃度為0.1～0.5mg/mL；

所述S1蛋白的工作濃度為1.5～2mg/mL；

所述S1蛋白與核衣殼蛋白以7:1的比例混合；

樣品墊制備時(shí)使用的樣品墊處理液為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3～0.5％酪蛋白鈉的Tris-HCl緩沖液；

所述結(jié)合墊制備時(shí)使用的結(jié)合墊處理液為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～3％的海藻糖和0.5～1.5％的酪蛋白鈉的Tris-HCl緩沖液；

所述試紙條包括順次搭接的樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，

所述核衣殼蛋白的工作濃度為0.25mg/mL；

所述S1蛋白的工作濃度為1.75mg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，

所述雞IgY抗體的工作濃度為0.8～1.2mg/mL；

稀釋所述新型冠狀病毒核衣殼蛋白、S1蛋白和雞IgY抗體時(shí)使用的溶液為包被稀釋液，所述包被稀釋液為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～3％蔗糖的PBS緩沖液；

所述質(zhì)控線位于硝酸纖維素膜上靠近吸水墊的一端，與吸水墊的距離為8～12mm；

所述檢測(cè)線位于硝酸纖維素膜上靠近結(jié)合墊的一端，與結(jié)合墊的距離為8～12mm。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條，其特征在于，

所述雞IgY抗體的工作濃度為1mg/mL；

所述包被稀釋液為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％蔗糖的PBS緩沖液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，

所述結(jié)合墊上羊抗人IgG抗體和羊抗雞IgY抗體的濃度比為(20～30):1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征在于，所述量子點(diǎn)標(biāo)記的羊抗人IgG抗體的制備方法為：

將活化的量子點(diǎn)微球與所述羊抗人IgG抗體混合反應(yīng)，所述量子點(diǎn)微球與抗體共價(jià)偶連，得到量子點(diǎn)標(biāo)記的羊抗人IgG抗體；

所述羊抗人IgG抗體與量子點(diǎn)微球的質(zhì)量比為(1～1.5):10；

所述量子點(diǎn)微球的粒徑為80～120nm；

所述混合反應(yīng)的溫度為18～26℃；

所述活化使用的活化劑包括Sulfo-NHS和EDC；

所述Sulfo-NHS的質(zhì)量濃度為10～30mg/mL；

所述EDC的質(zhì)量濃度為10～30mg/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試紙條，其特征在于，所述Sulfo-NHS的質(zhì)量濃度為20mg/mL；

所述EDC的質(zhì)量濃度為20mg/mL。

8.一種如權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述的試紙條的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

(1)制備量子點(diǎn)標(biāo)記的羊抗人IgG抗體和量子點(diǎn)標(biāo)記的羊抗雞IgY抗體，再將所述標(biāo)記后的抗體混合后噴膜得到結(jié)合墊；

(2)將雞IgY抗體稀釋后劃線到硝酸纖維素膜上形成質(zhì)控線，將新型冠狀病毒核衣殼蛋白和S1蛋白稀釋后劃線到所述硝酸纖維素膜上形成檢測(cè)線；

(3)將吸水墊、硝酸纖維素膜、結(jié)合墊和樣品墊依次固定于底板上得到所述試紙條。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述噴膜的噴量為3～8μL/cm；

步驟(2)所述劃線的濃度為0.8～1.2μL/cm，速度80～120mm/s；

制備得到所述結(jié)合墊和硝酸纖維素膜后還包括干燥的操作，所述干燥為將結(jié)合墊或硝酸纖維素膜放置在溫度18～26℃、濕度≤30％的烘箱中干燥16～18h。