[發(fā)明專利]與血腦屏障破壞程度相關(guān)的血清外泌體miR-410-3p的應(yīng)用及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010523834.6
• 申請(qǐng)日: 2020-06-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111621558B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 季煜華;季秋虹;周心;季菊玲;邵倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/113
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

本發(fā)明提供一種與腦缺血后血腦屏障破壞程度相關(guān)的血清外泌體miR?410?3p，所述血清外泌體miR?410?3p的序列為AATATAACACAGATGGCCTGT。血清外泌體miR?410?3p可用于評(píng)估腦缺血后血腦屏障破壞程度的生物標(biāo)志物。本發(fā)明提供的血清外泌體miR?410?3p表達(dá)水平的檢測(cè)方法包括如下步驟：（1）建立小鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型，缺血再灌注，并收集血清；（2）分離血清中的外泌體；（3）實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)腦缺血再灌注損傷和恢復(fù)不同階段的血清外泌體中miR?410?3p的表達(dá)水平。本發(fā)明的技術(shù)方案證實(shí)了血清外泌體中miR?410?3p的表達(dá)的趨勢(shì)與BBB損傷和修復(fù)過(guò)程基本一致，血清外泌體miR?410?3p可作為一種評(píng)判腦缺血性損傷的生物標(biāo)志物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種與腦缺血后血腦屏障破壞程度相關(guān)的血清外泌體miR-410-3p的應(yīng)用及其表達(dá)水平的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

2016年的全球疾病負(fù)擔(dān)(Global?Burden?of?Disease，GBD)數(shù)據(jù)顯示腦卒中是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡和殘疾的第二原因，其中又以東亞的發(fā)病率最高(Gorelick,2019)。隨著我國(guó)人口平均壽命延長(zhǎng)和社會(huì)的老齡化，過(guò)去30年里我國(guó)腦卒中疾病負(fù)擔(dān)有爆發(fā)式增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)，40歲以上腦卒中現(xiàn)患病人數(shù)已超過(guò)1200萬(wàn)(中國(guó)腦卒中防治報(bào)告2018)。腦卒中給個(gè)人帶來(lái)巨大的身心痛苦，給家庭及社會(huì)造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前臨床治療卒中的有效方法是靜脈溶栓及機(jī)械取栓，但由于治療時(shí)間窗狹窄且諸多因素限制了其使用，僅小部分(3.4％-5.2％)患者能得到有效救治(Donnan,Fisher,Macleod,Davis,2008)。

血腦屏障(blood-brainbarrier,BBB)是外周循環(huán)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)之間的一個(gè)受到嚴(yán)格調(diào)節(jié)的界面，通過(guò)調(diào)節(jié)血液和腦組織之間的離子、氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流入和流出,限制毒素和病原體入侵,保護(hù)脆弱的神經(jīng)組織,維持大腦微環(huán)境穩(wěn)態(tài),保證神經(jīng)系統(tǒng)功能正常發(fā)揮(Pardridge,2003)。腦卒中發(fā)生后，血腦屏障的通透性增加、完整性被破壞，大量血液成分進(jìn)入缺血組織，進(jìn)而引起炎癥和水腫。急性卒中患者血腦屏障破壞程度與患者的預(yù)后密切相關(guān)(Jiang?et?al.,2018)，同時(shí)也與急性血管內(nèi)治療后顱內(nèi)出血(ICH)的風(fēng)險(xiǎn)和嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(Ren?ú?et?al.,2015)。

目前BBB完整性檢測(cè)的方法主要有兩類：體外的檢測(cè)方法和在體的影像學(xué)方法(Domi,Honarvar,Kassner,2019)。常用的體外檢測(cè)方法包括：伊文氏藍(lán)(Evans?blue，EB)半定量分析、免疫組織化學(xué)法和電子顯微鏡檢查法。EB染色是最為常用的一種評(píng)價(jià)BBB完整性的半定量方法。但該方法的操作過(guò)程繁瑣，易受人為因素的干擾。通過(guò)檢測(cè)血液中血清白蛋白和免疫球蛋白IgG的免疫組織化學(xué)法也可以半定量評(píng)價(jià)BBB的通透性，同時(shí)還能進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。電子顯微鏡則可以觀察到BBB超微結(jié)構(gòu)的改變，被認(rèn)為是檢測(cè)BBB破壞的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但電子顯微鏡檢測(cè)存在不能提供定量分析，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、靈敏度較差等缺點(diǎn)。上述這3種檢測(cè)方法都要犧牲實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，無(wú)法進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)研究。

臨床評(píng)估腦卒中患者BBB完整性的體外檢測(cè)方法主要是基于腦脊液和血液的生化指標(biāo)。由于BBB的存在，血和腦脊液中許多物質(zhì)的含量有極大的區(qū)別，BBB受到破壞時(shí)，腦脊液或血液中物質(zhì)含量發(fā)生變化，其幅度與BBB破壞的程度相關(guān)。因此，可通過(guò)檢測(cè)這些物質(zhì)在體液中的含量來(lái)評(píng)價(jià)BBB的功能和通透性。但此類方法較為間接，且此類指標(biāo)的靈敏度各不相同。常見(jiàn)的方法有：1、腦脊液/血清白蛋白比值(BBB指數(shù)＝腦脊液蛋白/血清白蛋白)是評(píng)估血腦屏障通透性的一種常見(jiàn)且成熟的方法，但它具有侵入性(需要做穿刺)；此外，由于受腦脊液流量的影響較大，因此不能可靠地反映血腦屏障通透性。2、髓鞘堿性蛋白，通過(guò)測(cè)定血液中髓鞘堿性蛋白來(lái)評(píng)價(jià)BBB破壞程度。