[發明專利]一種基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法

在審

• 申請號: 202010523100.8
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN112029750A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 夏建業;劉姍姍
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N9/28
• 分類號: C12N9/28;G01N27/62;G01N27/416;G01N21/31;C12R1/125
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

1.一種基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，在枯草芽孢桿菌批培養發酵中，在線檢測尾氣中的OUR的變化趨勢，在OUR下降的時間點進行流加補料，使OUR呈現平穩或者緩慢下降的狀態，繼續發酵合成α-淀粉酶；所述補料為葡萄糖或全培養基。

2.根據權利要求1所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，所述全培養基包括：玉米淀粉210.67g/L、豆粕50g/L、棉粕53.33g/L、氯化鈣1.33g/L、氯化銨3.07g/L、玉米漿20g/L、磷酸氫二鈉11.07g/L、高溫淀粉酶0.01mL/100mL。

3.根據權利要求1或2所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，在所述枯草芽孢桿菌批培養發酵中，包括如下步驟：

批培養發酵：發酵罐中裝有發酵罐培養基，調節溫度至34℃后接種枯草芽孢桿菌，接種量為10％，進行發酵，發酵過程中控制pH為6.2～6.8、溶氧40％以上；

流加補料發酵：待上述批培養發酵尾氣中的OUR出現下降時，按總糖量流加全培養基或按還原糖流加葡萄糖，使OUR保持平穩不再下降，后發酵至發酵結束。

4.根據權利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，所述補料的流加速率與所述批培養發酵過程中穩定期的耗糖量相同。

5.根據權利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，批培養發酵：發酵罐中裝有發酵罐培養基，裝液量為3/5，調節溫度至34℃后接種枯草芽孢桿菌，接種量為10％，在攪拌轉速300epm rpm、通氣量為6L/min、罐壓0.05Kpa的條件下標定溶氧150％，進行發酵，發酵過程中控制pH為6.2～6.8、溶氧40％以上。

6.根據權利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，在所述批培養發酵前，用飽和亞硫酸鈉溶液標定溶氧電極至0％。

7.根據權利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，所述發酵罐培養基包括：玉米淀粉158g/L、豆粕37.5g/L、棉粕40g/L、氯化鈣1g/L、氯化銨2.3g/L、玉米漿17.25g/L、磷酸氫二鈉8.3g/L、高溫淀粉酶0.01mL/100mL。

8.根據權利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，流加補料后發酵pH值回升至7.3～7.7為發酵結束。

9.根據權利要求3所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，所述接種的枯草芽孢桿菌經過種子搖瓶培養得到，步驟如下：取甘油管中菌液接種至種子搖瓶培養基中，接種量為0.6％，在溫度34℃、轉速220r/min的條件下搖瓶發酵，培養24h。

10.根據權利要求9所述的基于OUR的枯草芽孢桿菌產中溫α-淀粉酶的流加發酵方法，其特征在于，所述種子搖瓶培養基包括：玉米淀粉47.4g/L、豆粕11.25g/L、棉粕12g/L、氯化鈣0.5g/L、氯化銨1.15g/L、玉米漿4.5g/L、磷酸氫二鈉3g/L、高溫淀粉酶0.01mL/100mL和卡那霉素25ug/mL。