[發明專利]一種雙效熒光增強的免疫分析方法

有效

• 申請號: 202010520800.1
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN111579771B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 何化;陳曉良;劉迪;史新建;黃方
• 申請（專利權）人: 中國石油大學（華東）
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 付麗麗

本發明公開了一種雙效熒光增強的免疫分析方法，將金屬納米粒子熒光探針與待測物質結合，然后置于金屬納米膜上進行熒光成像，實現免疫檢測，所述金屬納米粒子熒光探針為金屬納米粒子、抗體和熒光劑結合構建的金屬納米棒免疫探針。該方法能夠有效提高熒光強度，方便熒光成像和檢測。實現了納米銀膜與金納米棒雙效增強熒光技術應用到癌細胞的熒光免疫成像。

技術領域

本發明涉及免疫分析技術領域，具體涉及一種基于金屬表面熒光增強的熒光免疫成像檢測方法。

背景技術

疾病的體外診斷是指在機體外通過物理化學等實驗方法對血液、體液、細胞、組織等機體成分或附屬物進行檢測，從而獲取疾病預防、診治、監測、預后判斷、健康等數據的行為。體外診斷是目前疾病診斷學發展最為活躍的領域，臨床上80％以上的疾病是依靠體外診斷完成的。

免疫熒光檢測應用免疫學原理，以熒光探針標記特異性的抗體或抗原作為標準試劑定量分析和檢測樣品本中的相應抗體和抗原。在醫院檢驗科主要用于檢測體液、細胞組織中與疾病相關的蛋白質等標志物，以達到疾病預警和診斷的目的。免疫熒光檢測是目前生物醫學診斷中一種不可或缺的檢測方法，不過，現有熒光免疫檢測方法仍存在熒光亮度不高，易于淬滅、細胞和組織自熒光干擾強等缺點，難以適應目前疾病體外診斷發展的需要。

發明內容

本方法利用金屬表面增強熒光的原理，以納米銀膜表面作為基底和金納米棒作為熒光增強探針，發展了一種熒光雙效增強的免疫分析技術，實現了細胞中惡性腫瘤相關特異性受體的高靈敏成像檢測。研究發現：銀膜與金納米棒對于熒光、尤其是近紅外熒光增強存在協同效應，基于此發展的雙效增強熒光免疫分析技術可將熒光信號和檢測靈敏度提高1個數量級。

本發明采用以下技術方案：

一種雙效熒光增強的免疫分析方法，將金屬納米粒子熒光探針與待測物質結合，然后置于金屬納米膜上進行熒光成像，實現免疫檢測。

進一步地，所述金屬納米粒子熒光探針為金屬納米粒子、抗體和熒光劑結合構建的金屬納米棒免疫探針，即金屬納米粒子熒光探針為金納米棒-抗體-熒光劑的復合物。

進一步地，所述金屬納米粒子為金納米粒子，金屬納米膜為納米銀膜，或所述金屬納米粒子為銀納米粒子，金屬納米膜為納米金膜。

進一步地，所述抗體為能夠與熒光劑結合的一抗或二抗，熒光劑為AF647染料。

所述納米銀膜采用以下方法制備：

1、將清洗干凈的載玻片放入配置好的piranha溶液中，浸泡過夜；

2、將過夜后的載玻片置于潔凈干燥的培養皿中，放入10mL3.75g/L硝酸銀溶液，再加入1mL濃氨水，至于振動器上搖晃20min；

3、依次向培養皿中加入10mL3.75g/L硝酸銀溶液、2mL濃氨水、10mL?36g/L葡萄糖溶液，在振動器上進行；

4、向培養皿中逐滴加1M的氫氧化鈉溶液6mL，邊滴加邊觀察，直到玻璃片上長銀，待銀膜鋪滿整個載玻片后，用超純水洗凈銀膜，氮氣吹干，密封避光保存。

與現有技術相比，該方法能夠有效提高熒光強度，方便熒光成像和檢測。實現了納米銀膜與金納米棒雙效增強熒光技術應用到癌細胞的熒光免疫成像。本文提出的納米銀膜-金納米棒雙效增強近紅外熒光新技術，有望成為熒光免疫成像領域中檢測腫瘤細胞的有效技術手段。

附圖說明

圖1為本發明制備的納米銀膜照片。

圖2為本發明制備的納米銀膜紫外可見吸收光譜圖。

圖3為本發明制備的金納米棒紫外可見吸收光譜圖。

圖4為本發明制備的金納米棒TEM圖。