[發明專利]一種用于檢測布魯氏菌病ELISPOT檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202010519967.6
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111638329B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 王文敬;李金峰;任慧;黎誠耀
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉春風

本發明公開了一種用于檢測布魯氏菌病的ELISPOT檢測試劑盒及其應用。一種用于檢測布魯氏菌病的ELISPOT檢測試劑盒，所述ELISPOT檢測試劑盒包括：支持介質、捕獲抗體、檢測抗體、陰性對照和陽性對照和特異性刺激劑，所述ELISPOT檢測試劑盒還包括特異性抑制劑，以通過特異性刺激劑和特異性抑制劑雙向來測定是否存在布魯氏菌感染。本發明ELISPOT檢測試劑盒通過正反實驗來測定是否存在布魯氏菌感染，檢測結果更為客觀、準確，更能真實反映體內免疫水平，以解決現行布魯氏菌感染檢測中存在的準確率低、周期長等問題。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及一種用于檢測布魯氏菌病的ELISPOT檢測試劑盒及其應用。

背景技術

布魯氏菌病（Brucellosis，簡稱布病）是一種嚴重威脅人類和多種動物生命健康的人獸共患傳染病。患病的羊、牛等疫畜是布病的主要傳染源，布魯氏菌可以通過破損的皮膚黏膜、消化道和呼吸道等途徑傳播。急性期病例以發熱、乏力、多汗、肌肉、關節疼痛和肝、脾、淋巴結腫大為主要表現。慢性期病例多表現為關節損害等。布病是我國《傳染病防治法》規定的乙類傳染病。據我國CDC 2019年統計報告，人布病新增至37947人，居甲乙兩類傳染病發病率前10名。布病的流行趨勢發生明顯改變，即布病疫區從牧區向半農半牧區、農區及城市蔓延；形式以多且散的點狀流行代替了大規模的暴發流行；除職業人群受侵外，非職業人群感染率也相對上升，成為最嚴重的公共衛生問題之一。

目前，布病的常規檢疫手段以細菌學和血清學檢測技術為主，細菌學檢測是目前確定體內帶菌的最可信方法，但陽性檢出率非常低。而且，布魯氏菌生長緩慢，絕大多數需要至少7～15天，而且受實驗環境和專業操作人員限制。當前，布病血清學診斷方法主要包括凝集試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、補體結合試驗（CFT）等。凝集試驗包括虎紅平板凝集試驗（RBPT）、全乳環狀試驗（MRT）、試管凝集試驗（SAT）、卡片試驗和緩沖平板凝集試驗（BBAT）等，其中RBPT 與MRT 成為國際貿易和奶牛布病檢測中的初篩方法，人布病血清學診斷以凝集試驗RBPT初篩，臨床初診患者SAT 1：100++以上確認為布病，細菌學陽性為感染的臨床標準。

血清學檢測方法因其簡便快捷、易于實施等優勢成為重要的檢測方法。由于布魯氏菌傳統試驗所用抗原的有效成分主要是脂多糖（LPS），與革蘭氏陰性菌，尤其O:9型耶爾森氏菌有交叉反應，干擾結果的準確度。另外，在感染早期或抗體滴度較低的時期，尤其是在感染布魯氏菌12～16天內，很難通過檢測抗體檢測出布魯氏菌感染。另外，布魯氏菌是胞內寄生菌，在布魯氏菌感染的后期，血清中也常出現無法檢測出布魯氏菌標志物的情況。

總而言之，在布魯氏菌病原學檢測方面目前還沒有一種快速，準確的，臨床上行之有效的檢測方法。

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明的目的在于提供了一種用于檢測布魯氏菌病的ELISPOT檢測試劑盒及其應用，該檢測試劑盒通過正反實驗來測定是否存在布魯氏菌感染，檢測結果更為客觀、準確，更能真實反映體內免疫水平，以解決現行布魯氏菌感染檢測中存在的準確率低、周期長等問題。本ELISPOT檢測試劑盒較現有布魯氏菌病檢測技術具有準確率高、簡便、快捷等特點。

本發明所要解決的技術問題通過以下技術方案予以實現：

第一方面，一種用于檢測布魯氏菌病的ELISPOT檢測試劑盒，所述ELISPOT檢測試劑盒包括：支持介質、捕獲抗體、檢測抗體、陰性對照、陽性對照和特異性刺激劑，所述ELISPOT檢測試劑盒還包括特異性抑制劑，以通過正向的特異性刺激劑和反向的特異性抑制劑來測定是否存在布魯氏菌感染。

如上所述的用于檢測布魯氏菌病的ELISPOT檢測試劑盒，所述特異性抑制劑包括布魯氏菌脂化型外膜蛋白16（L-OMP16）或者該蛋白的多肽。

如上所述的用于檢測布魯氏菌病的ELISPOT檢測試劑盒，所述特異性刺激劑包括布魯氏菌脂多糖（LPS）、特異性蛋白及該特異性蛋白多肽的一種或幾種。