[發(fā)明專利]一種高效去除水環(huán)境氮素的菌種生長促進(jìn)劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010519196.0
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111621462B
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王啟宇;吳永明;涂文清;劉煜;鄧覓;辛在軍
• 申請（專利權(quán)）人: 江西省科學(xué)院
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/20;C12R1/07;C12R1/19;C12R1/38
• 代理公司: 北京金智普華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.一種高效去除水環(huán)境氮素的菌種生長促進(jìn)劑，其特征在于，所述高效去除水環(huán)境氮素的菌種生長促進(jìn)劑為針對硝化細(xì)菌的生長促進(jìn)劑和針對反硝化細(xì)菌的生長促進(jìn)劑中的一種；

所述針對硝化細(xì)菌的生長促進(jìn)劑或針對反硝化細(xì)菌的生長促進(jìn)劑均由VB12 0.1 mg/L、Thiamine 1mg/L以及按體積比添加的1% E.coli抽提液組成，所述 E.coli抽提液為8-10倍濃縮的OD₆₀₀=0.8-1.2菌抽提液。

2.一種如權(quán)利要求1所述的高效去除水環(huán)境氮素的菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述高效去除水環(huán)境氮素的菌種的培養(yǎng)方法包括針對硝化細(xì)菌的培養(yǎng)方法；所述針對硝化細(xì)菌的培養(yǎng)方法包括以下步驟：

步驟一，富集培養(yǎng)：將芽孢桿菌接種于富集培養(yǎng)基，置于 32 ℃、180 r/min的恒溫?fù)u床中進(jìn)行富集，至OD₆₀₀=1.3-1.7；

步驟二，配置VB12母液1 mg/L，Thiamine母液10 mg/L，并經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌，-20℃保存；

步驟三，將單克隆E.coli接種于LB培養(yǎng)基，37℃，220 rpm恒溫培養(yǎng)至OD₆₀₀=0.8-1.2；

步驟四，取200 mL菌液，5000 rpm室溫離心10 min，收集沉淀，加入25 mL PBS混勻，800bar高壓破碎3-5次，于4℃，10000 g離心10 min，收集上清，0.22 μm濾膜過濾除菌，-20℃保存；

步驟五，取步驟一中富集菌液1 mL分別轉(zhuǎn)接至含VB12 0.1 mg/L、Thiamine 1mg/L的E.coli硝化培養(yǎng)基中32 ℃、180 r/min培養(yǎng)32 h，每隔4 h取樣測定OD₆₀₀，并利用納氏試劑光度法測定16 h時培養(yǎng)液上清NH₄⁺-N含量。

3.如權(quán)利要求2所述的高效去除水環(huán)境氮素的菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟一中，所述富集培養(yǎng)基包括：KNO₃ 0.7 g/L，葡萄糖 2.75 g/L，KH₂PO₄·2H₂O 1.24 g/L，K₂HPO₄·3H₂O 3.046 g/L，NaCl 4 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.05 g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01 g/L，MnSO₄ 0.01 g/L，pH 7.0。

4.如權(quán)利要求2所述的高效去除水環(huán)境氮素的菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟三中，所述LB培養(yǎng)基包括：NaCl 10 g/L，蛋白胨 10 g/L，酵母粉5g/L，pH 7.0-7.2；

步驟四中，所述PBS包括：NaCl 8 g/L，KCl 0.2 g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 3.63 g/L，KH₂PO₄0.24 g/L，pH 7.2-7.4；

步驟五中，所述硝化培養(yǎng)基包括：(NH₄)₂SO₄ 0.4 g/L，檸檬酸鈉5 g/L，NaCl 0.01 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.05 g/L，KH₂PO₄·2H₂O 1.24 g/L，K₂HPO₄·3H₂O 3.046 g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O0.01 g/L，MnSO₄ 0.01 g/L，pH 7.0。