[發明專利]病理切片制作過程中一種新型的脫蠟方法

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• 申請號: 202010518910.4
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111650018A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 朱穩森
• 申請（專利權）人: 北京恩?？缔r業技術咨詢有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N1/36;G01N1/44
• 代理公司: 北京久維律師事務所 11582
• 代理人: 邢江峰

1.病理切片制作過程中一種新型的脫蠟方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1、取材：選擇其體積大致為2cm×2cm×3mm；如果取動物的腦子等比較大的器官時，注意要當中切兩下，這樣會使福爾馬林溶液完全浸透組織；

S2、固定：選擇適量的固定液迅速固定動物新鮮的組織；

S3、脫水、透明、浸蠟：選擇合適的脫水劑把S2固定后含有較多水分的組織脫水；選擇不同濃度的酒精作為脫水劑，然后選擇二甲苯作為酒精和石蠟相互作用的溶劑，該二甲苯也是最好的透明劑；用石蠟的目的是浸蠟來除去二甲苯，使得石蠟完全占據組織，便于后續的包埋；

S4、組織包埋：把脫水后的組織放入包埋專用的小鐵盒內，注意組織下面的平整度，然后接一點石蠟，剛覆蓋包埋盒就好，然后置于冷卻板冷卻；

S5、切片：所述切片包括初切和細切，該初切目的是讓組織完全暴露在蠟塊表面，初切的厚度一般可以選擇40微米，初切完蠟塊之后要把蠟塊置于包埋機冷卻板或者冰塊里面；然后細切，細切的厚度一般可以選擇3到5微米；細切的時候注意運用加濕器，這樣切出來的組織片不會干的太厲害，挑選褶皺少的，相對很整齊的切片放入展片機內，展片機里面的水要用水溫在40-45⁰C的蒸餾水；

S6、拷片：等組織片完全展開之后，用載玻片撈上來，注意撈的時候在組織片和載玻片之間盡量不要有水分，撈起來之后，要甩一甩，這樣能使組織和載玻片之間的水分變得更少一些，把標記好的及甩完之后的載玻片放置在溫度為60攝氏度的拷片機中烤干；

S7、脫蠟：選擇石蠟——二甲苯——酒精——水的方法脫蠟或者一種新型脫蠟方法；

S8、染色：常用的染色方法為蘇木素-伊紅染色法，簡稱he染色，具體過程如下：

百分之零點五的蘇木素四分鐘；

百分之一的鹽酸十五秒；

伊紅十五秒，每次過程都要經過流水兩到三分鐘；

S9、最后一步吹干及封片。

2.根據權利要求1所述一種病理切片的制作方法，其特征在于：在S2中，所述固定液為百分之十的甲醛溶液或者百分之七十五的無水乙醇。

3.根據權利要求2所述一種病理切片的制作方法，其特征在于：所述甲醛溶液中的甲醛的濃度為百分之三十五到百分之四十。

4.根據權利要求1所述一種病理切片的制作方法，其特征在于：在S7中，所述石蠟——二甲苯——酒精——水的方法為：石蠟和水不相溶，脫蠟一般要溶于二甲苯和酒精，因為石蠟溶于二甲苯，二甲苯又溶于酒精，酒精又溶于水，所以這樣逐級置換就能把石蠟和二甲苯完全置換出來；具體步驟如下：

先倒入同樣濃度的二甲苯分兩次；第一次二甲苯十分鐘，第二次二甲苯十分鐘；

然后就是倒入不同濃度的無水乙醇，無水乙醇依照次序：百分之百的無水乙醇一分鐘；百分之百的無水乙醇一分鐘；百分之九十五的無水乙醇兩分鐘；百分之九十五的無水乙醇兩分鐘；百分之八十的無水乙醇兩分鐘，最后流水沖洗。

5.根據權利要求1所述一種病理切片的制作方法，其特征在于：在S7中，該新型脫蠟方法僅有三步，并且所需時間很短；具體步驟如下：

把水燒至特定溫度下；

把5毫升的特殊溶劑（環保材料，手可以直接觸碰）置于一個小鐵鍋內，倒入剛燒的熱水，把載玻片置于小鐵鍋內，定時相應時間；重復以上步驟；

最后流水沖洗；

該方法大大的縮短了脫蠟時間，并且在脫蠟過程中避免了使用二甲苯，省時環保。