[發(fā)明專利]一種金鐘藤無(wú)性擴(kuò)繁的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010515718.X
• 申請(qǐng)日: 2020-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN111543326B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張守信;周韜;龍文興
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海南大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01C1/08;A01C1/00
• 代理公司: ?？谙柘鑼＠聞?wù)有限公司 46001
• 代理人: 張耀婷

本發(fā)明公開了一種金鐘藤無(wú)性擴(kuò)繁的方法，包括以下步驟：(1)種子預(yù)處理；(2)種子培養(yǎng)；(3)無(wú)菌苗擴(kuò)繁；(4)新植株擴(kuò)繁。本發(fā)明解決了傳統(tǒng)扦插體系成活率低、種子實(shí)生苗發(fā)芽率低且后代產(chǎn)生性狀分離的問(wèn)題，本發(fā)明可以使任意一個(gè)具有優(yōu)良性狀的金鐘藤基因型個(gè)體大量快速無(wú)性繁殖，使該基因型個(gè)體在一定時(shí)間后產(chǎn)生大量同基因型植株。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物繁殖培育技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種金鐘藤種子的無(wú)性系培育技術(shù)，具體涉及一種金鐘藤無(wú)性擴(kuò)繁的方法。

背景技術(shù)

金鐘藤，又名多花山豬菜，旋花科茉欒藤屬多年生木質(zhì)藤本植物，其葉可作為豬或其它家畜的食物，有作為飼料的利用價(jià)值。金鐘藤生長(zhǎng)在次生林林緣，且近些年來(lái)隨溫度升高生長(zhǎng)范圍逐漸增大有災(zāi)變化的趨勢(shì)。已有研究為探明金鐘藤的快速生長(zhǎng)的機(jī)制有了長(zhǎng)足的進(jìn)展，金鐘藤的光合作用速率對(duì)光、熱的正向響應(yīng)敏感且強(qiáng)烈，隨著一定范圍內(nèi)光強(qiáng)的增加或溫度的上升金鐘藤的光合速率與生長(zhǎng)速率明顯增加，且金鐘藤的種子對(duì)光、溫度也有相同的響應(yīng)，發(fā)芽率會(huì)顯著增高。但是金鐘藤的種子近乎100％都具有硬實(shí)現(xiàn)象，種皮不容易透水，不能快速吸漲，種子發(fā)芽率較低，現(xiàn)有技術(shù)中金鐘藤的扦插體系成活率低于10％。

在分子研究層面，植株的無(wú)性系是做實(shí)驗(yàn)的最佳材料，但目前對(duì)金鐘藤無(wú)性系培育的研究近乎空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供了一種金鐘藤無(wú)性擴(kuò)繁的方法，解決了傳統(tǒng)扦插體系成活率低、種子實(shí)生苗發(fā)芽率低且后代產(chǎn)生性狀分離的問(wèn)題，本發(fā)明可以使任意一個(gè)具有優(yōu)良性狀的金鐘藤基因型個(gè)體大量快速無(wú)性繁殖，使該基因型個(gè)體在一定時(shí)間后產(chǎn)生大量同基因型植株。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：提供一種金鐘藤無(wú)性擴(kuò)繁的方法，包括以下步驟：

(1)種子預(yù)處理：在無(wú)菌條件下，將金鐘藤種子的尖端開邊長(zhǎng)1～2毫米的小口后浸泡于75％酒精中15秒；

(2)種子培養(yǎng)：將步驟(1)的種子放入經(jīng)過(guò)高溫蒸汽滅菌的培養(yǎng)基中，密封后于無(wú)菌培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為23～28℃，光照或黑暗10～12h，光照強(qiáng)度90～120Lux；所述培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基；

(3)無(wú)菌苗擴(kuò)繁：將步驟(2)培養(yǎng)得到的至少五片葉子的無(wú)菌苗，將無(wú)菌苗剪接成段，每段都包含一個(gè)腋芽，再將每段無(wú)菌苗插入到含有激素的培養(yǎng)基中，腋芽不能被培養(yǎng)基浸沒(méi)；所述激素包括IBA和6-BA，培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基；

(4)新植株擴(kuò)繁：將步驟(3)中發(fā)育成至少五片葉子的新植株，按照步驟(3)的操作，即可完成金鐘藤無(wú)性擴(kuò)繁。

較佳的，步驟(3)中，每段無(wú)菌苗腋芽旁邊的葉片剪去2/3，形態(tài)學(xué)下段插入預(yù)先高溫蒸汽滅菌的含有激素的培養(yǎng)基中。

本發(fā)明金鐘藤無(wú)性擴(kuò)繁的方法具有以下的有益效果：

1、本發(fā)明采用75％的酒精浸泡種子，可以減少種子霉變幾率，再將種子尖端開邊長(zhǎng)1～2毫米的小口，不僅破除了金鐘藤種子硬實(shí)對(duì)種子的影響，切口尺寸的要求還保證了子葉不會(huì)徒長(zhǎng)，子葉胚軸不會(huì)斷開，從而提高種子發(fā)芽率和實(shí)生苗的存活率。

2、本發(fā)明采用長(zhǎng)到至少五片葉子的無(wú)菌苗進(jìn)行擴(kuò)繁，無(wú)菌苗中的莖和腋芽的成熟度已達(dá)到擴(kuò)繁的要求，擴(kuò)繁后的葉片不會(huì)泛黃，葉片長(zhǎng)大后能保持蔥綠。

3、本發(fā)明幼苗培養(yǎng)120天左右會(huì)由原來(lái)的植株莖段產(chǎn)生愈傷組織，愈傷組織再分化產(chǎn)生新的根、莖、葉，形成完整植株，該植株與母株和其他分株基因型完全相同，且該植株可再次剪切形成新的植株苗，在一定時(shí)間內(nèi)獲得幾何倍數(shù)的同一基因型實(shí)驗(yàn)材料。

4、本發(fā)明解決了傳統(tǒng)扦插體系成活率低、種子實(shí)生苗發(fā)芽率低且后代產(chǎn)生性狀分離的問(wèn)題，節(jié)約了優(yōu)良品種的材料，本發(fā)明擴(kuò)繁中使用的培養(yǎng)基配方可以使任意一個(gè)具有優(yōu)良性狀的金鐘藤基因型個(gè)體大量快速無(wú)性繁殖，使該基因型個(gè)體在一定時(shí)間后產(chǎn)生大量同基因型植株。