[發(fā)明專利]一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010515538.1
• 申請(qǐng)日: 2020-06-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111575369A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方小云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 俊兮生物科技（上海）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于：包括核酸預(yù)提懸浮液、核酸擴(kuò)增試劑和對(duì)照品；

核酸預(yù)提懸浮液為透明樹(shù)脂材料的懸浮液，核酸預(yù)提懸浮液包括1-30 %的樹(shù)脂顆粒、0-100 mM Tris-HCl、0-10 mM EDTA和工藝用水；

核酸擴(kuò)增試劑包括預(yù)混工作液和MTHFR 反應(yīng)液；

對(duì)照品包括陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照；

試劑盒所檢測(cè)樣本為血液或唾液樣本。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，預(yù)混工作液包括0-100 mM Tris-HCl、0-10 mM MgCl2、0-10 mM DTT、0-10 mM EDTA、0-10 mM dATP、0-10 mM dCTP、0-10 mM dGTP、0-10 mM dTTP 、0-10 mM dUTP、0-1 U/ul UNG酶、0-1 U/ul Taq酶和工藝用水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，MTHFR 反應(yīng)液中分別包括用于檢測(cè)MTHFR C677T突變的特異性引物和探針。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，用于檢測(cè)MTHFR C677T突變的特異性引物包括一對(duì)2-10 mM上游引物和2-10 mM下游引物。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，探針為2-10 mMTaqMan熒光探針。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，特異性引物和探針序列及修飾如下：上游引物5’-TGCATGCCTTCACAAA -3’；下游引物5’-TGAGGCTGACCTGAA-3’；突變探針5’-FAM-AAATCGACTCCCGC -MGB-3’；野生探針5’-VIC/HEX-AAATCGGCTCCCGC -MGB-3’。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，陰性對(duì)照為工藝用水，陽(yáng)性對(duì)照為突變質(zhì)粒和野生型細(xì)胞株DNA混合物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種基于直擴(kuò)型的人MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，野生質(zhì)粒包含的部分MTHFR基因片段序列如下：GGCCCCTCACCTGGATGGGAAAGATCCCGGGGACGATGGGGCAAGTGATGCCCATGTCGGTGCATGCCTTCACAAAGCGGAAGAATGTGTCAGCCTCAAAGAAAAGCTGCGTGATGATGAAATCGGCTCCCAAATCGACTCCCGCAGACACCTTCTCCTTCAAGTGCTTCAGGTCAGCCTCAAAGCTCCCTGCTTCGGGGTGGCCTTTGGGGTAACCTGCCAATAGG。