[發明專利]一種鑒別三種藥用黃精品種的方法

有效

• 申請號: 202010512201.5
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111505171B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 蔡永萍;冉銳;童金鳳;張文武;金青;程曦
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 馬小星

1.一種鑒別三種藥用黃精品種的方法，所述三種藥用黃精為黃精、滇黃精和多花黃精，包括以下步驟：

(1)將黃精樣品、滇黃精樣品和多花黃精樣品分別研磨后分散于甲醇中，得到黃精樣品的甲醇分散液、滇黃精樣品的甲醇分散液和多花黃精樣品的甲醇分散液；

(2)將所述黃精樣品的甲醇分散液、滇黃精樣品的甲醇分散液和多花黃精樣品的甲醇分散液分別與鄰苯二酚的甲醇溶液混合，之后依次進行超聲和第一固液分離，所得第一液體物料分別于氯仿-水混合溶劑中進行提取，之后經第二固液分離，所得第二液體物料分別為黃精樣品的提取液、滇黃精樣品的提取液和多花黃精樣品的提取液；

(3)將所述黃精樣品的提取液、滇黃精樣品的提取液和多花黃精樣品的提取液中的溶劑去除后分別與鹽酸羥胺的吡啶溶液混合進行第一衍生化處理，之后與衍生化試劑混合進行第二衍生化處理，經第三固液分離，所得第三液體物料分別為黃精樣品的衍生液、滇黃精樣品的衍生液和多花黃精樣品的衍生液；其中，所述衍生化試劑包括N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷；

(4)以所述黃精樣品的衍生液、滇黃精樣品的衍生液和多花黃精樣品的衍生液作為待測樣品進行氣相色譜-質譜分析，并將所得數據進行多元統計學分析，根據所得特征性代謝產物，實現三種藥用黃精品種的鑒別。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述研磨的方式為液氮研磨；研磨后所得粉末過80目篩，取篩下物備用。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述黃精樣品的甲醇分散液、滇黃精樣品的甲醇分散液和多花黃精樣品的甲醇分散液中藥用黃精與甲醇的用量比均為100mg：1.4mL；所述鄰苯二酚的甲醇溶液中鄰苯二酚的濃度為0.2mg/mL；所述黃精樣品的甲醇分散液中黃精樣品與鄰苯二酚的甲醇溶液的用量比為100mg：60μL；

所述第一液體物料與氯仿-水混合溶劑中的氯仿以及水的體積比為1.4mL：750μL：1.4mL。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述超聲的溫度為40℃，時間為30min；所述提取的方式為渦旋振蕩1min。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述鹽酸羥胺的吡啶溶液中鹽酸羥胺的濃度為20mg/mL，所述鹽酸羥胺的吡啶溶液與黃精樣品的提取液的體積比為60μL：1mL。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述第一衍生化處理的溫度為60℃，時間為120min。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述衍生化試劑中N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的質量比為99:1，所述衍生化試劑與黃精樣品的提取液的體積比為60μL：1mL。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述第二衍生化處理的溫度為60℃，時間為90min。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，進行所述氣相色譜-質譜分析時，氣相色譜的操作條件包括：

DB-5石英毛細管柱60m×250μm×0.25μm；分流進樣，進樣量為1μL，分流比為10:1；進樣口溫度為280℃；離子源溫度為250℃；接口溫度為250℃；升溫程序：初始溫度為40℃，保持5min，以8℃/min速度升溫至280℃，保持5min；載氣為氦氣，載氣流速為1mL/min；溶劑延遲時間為14min；以m/z計，質量檢測范圍為33～600；

質譜的操作條件包括：

電噴霧電離源，離子源溫度為230℃，四級桿溫度為150℃，全掃描方式，電子能量為70eV；以m/z計，四極桿掃描范圍為35～780。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述多元統計學分析包括主成分分析和正交偏最小二乘法判別分析。