[發明專利]一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法

在審

• 申請號: 202010511317.7
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111856012A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 李春涯;張肖靜;王炎英
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N21/64
• 代理公司: 武漢卓越志誠知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42266
• 代理人: 胡婷婷

1.一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，以水溶性上轉換熒光納米材料為熒光供體，以碳量子點為熒光受體，包括如下步驟：

S1、制備水溶性上轉換熒光納米材料；

S2、合成目標癌抗原125適配體；

S3、采用酰胺化反應，完成目標癌抗原125適配體在水溶性上轉換熒光納米材料表面的修飾，得到上轉換熒光探針；

S4、制備碳量子點，將碳量子點分散于溶劑中，得到熒光受體溶液；

S5、將上轉換熒光探針和熒光受體溶液按不同體積比混合后，孵育，得到檢測探針，并在980nm激光器下測定各混合液的上轉換熒光強度，得到熒光猝滅效率最大的混合液中所對應的上轉換熒光探針濃度和熒光受體濃度；

S6、制備已知濃度的檢測體系，得到不同濃度的癌抗原125溶液，然后用步驟S5制得的檢測探針，檢測不同濃度的癌抗原125溶液，測定熒光恢復值，繪制標準曲線；

S7、制備待測樣品的檢測體系，測定待測樣品的熒光值，求得待測樣品中的目標癌抗原125的濃度。

2.根據權利要求1所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，所述水溶性上轉換熒光納米材料的粒徑為30～50nm，其表面修飾有氨基或羧基。

3.根據權利要求1所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，所述水溶性上轉換熒光納米材料為摻雜鑭系金屬的上轉換熒光納米粒子，所述上轉換熒光納米粒子的化學組成為NaYF₄：Yb，Ln，Ln是Er或Tm。

4.根據權利要求1所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，所述碳量子點的粒徑為2～4nm。

5.根據權利要求1所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，所述熒光猝滅效率最大的混合液中所對應的熒光受體濃度為0.1～0.12mg/mL。

6.根據權利要求3所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，所述水溶性上轉換熒光納米材料由如下方法制備得到：

1)以稀土氯化物為原料，油酸為配體，油酸/1-十八烯為混合溶劑，采用高溫溶劑熱法合成油酸包裹的稀土上轉換納米粒子；

2)采用超聲處理法將稀土上轉換納米粒子表面包裹的油酸除去；

3)采用表面配體交換法，使用聚丙烯酸對稀土上轉換熒光納米粒子進行水溶性修飾。

7.根據權利要求6所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述稀土氯化物中，稀土離子摩爾比為Y：Yb：Ln為(70～90)：(5～30)：(0.1～1)。

8.根據權利要求6所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，在步驟3)中，稀土上轉換熒光納米粒子與聚丙烯酸的用量比為1mg：(2～8)nmol。

9.根據權利要求1所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，步驟S6中，繪制標準曲線的具體操作是：取上轉換熒光探針濃度和熒光受體濃度分別為熒光猝滅效率最大時所對應的濃度的混合液9組，以其中一組混合液為空白樣，向其余各組混合液中分別加入已知濃度的癌抗原125溶液，再置于室溫下孵育5～90min；在980nm激光器下測定各組混合液的上轉換熒光強度，空白樣的熒光強度為F₀，加入癌抗原125溶液后的各組混合液的熒光強度為F，以為縱坐標，癌抗原125溶液濃度的對數為橫坐標，繪制標準曲線。

10.根據權利要求1所述的一種基于上轉換納米材料與碳量子點熒光共振能量轉移檢測癌抗原125的方法，其特征在于，步驟S7中，制備樣品檢測體系的具體操作是：取步驟S5所述上轉換熒光探針濃度和熒光受體濃度分別為熒光猝滅效率最大時所對應的濃度的混合液，加入未知濃度的目標物樣品，再置于室溫下孵育5～90min后，測定混合液的熒光強度F_x，計算的值，代入步驟S6得到的標準曲線，計算得到樣品中目標物的濃度。