[發明專利]一種利尿劑個體化用藥基因檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202010510577.2
• 申請日: 2020-06-07
• 公開（公告）號: CN111733230A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 陸軍
• 申請（專利權）人: 上海佰臻生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種利尿劑個體化用藥基因檢測試劑盒及其檢測方法，基因檢測試劑盒包括以下成分：NPPA(455TC)位點擴增和測序引物1對，每條引物1OD，引物序列（正向引物：AAGTTCAGAGGATGGGCACA，反向引物：ACACAAATGCAGCAGAGACC）；PCR擴增試劑：Taq酶混合液15μL（dNTP、l0×PCR反應緩沖液、MgCl2）；PCR產物純化試劑：3.2μLSAP酶混合物（SAP酶、ExoI酶、去離子水）；測序試劑：4.4μLBigDyemix（Bigdye、5×seq）、5μLEDTA、60μL乙醇溶液(100%)、200μL乙醇溶液(70%)、16μLHi?Di。本產品可以通過NPPA(455TC)基因分型檢測，使用關鍵技術為Sanger測序（準確率大于99.9%），通過該項目檢測可以指導高血壓患者根據個體的基因組信息實現個體化用藥,使藥物的療效達到最大，不良反應降到最小。

技術領域

本發明涉及基因檢測試劑盒領域，特別涉及一種利尿劑個體化用藥基因檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

臨床用藥結果表明，高血壓用藥的療效和不良反應存在較大的個體差異。遺傳藥理學和藥物基因組學的研究進展表明，除了性別、年齡、種族等原因外，藥物代謝酶、轉運體和靶點的遺傳變異是造成個體藥物反應差異的主要原因，根據個體特征與藥物治療相關的代謝酶、轉運體和靶點制定治療方案，實現個體化用藥,使藥物的療效達到最大，不良反應降到最小，具有十分重要的社會意義和經濟意義。

利尿藥是一類促進電解質和水從機體內排出、增加尿量、消除水腫的藥物。利尿藥自50年代進入臨床作為基礎降壓藥，至今仍為臨床常用。NPPA作為編碼ANP的前體，基因定位于染色體1p36-p35，編碼126個氨基酸的前心房腦鈉肽，而ANP為利尿劑，可控制細胞外液量及電解質平衡；ANP和血壓調控、心機肥厚和纖維化等有關。而有研究結果顯示，降低ANP水平可導致鹽敏感高血壓，提高ANP水平則可導致低血壓，大量研究證明，ANP及NPPA與多種心腦血管疾病相關，如心力衰竭、腦卒中及高血壓等。NPPA(455TC)野生型患者對利尿藥的反應差，治療作用不好基因突變的患者，對利尿藥的反應敏感，治療作用好；突變患者建議使用利尿藥。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的缺陷，提供一種利尿劑個體化用藥基因檢測試劑盒及其檢測方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案：

本發明一種利尿劑個體化用藥基因檢測試劑盒，包括以下成分：

(1)NPPA(455TC)位點擴增和測序引物1對，每條引物1OD，引物序列 (正向引物：AAGTTCAGAGGATGGGCACA，反向引物：ACACAAATGCAGCAGAGACC)；

(2)PCR擴增試劑：Taq酶混合液15μL(dNTP、l0×PCR反應緩沖液、 MgCl2)；

(3)PCR產物純化試劑：3.2μLSAP酶混合物(SAP酶、ExoI酶、去離子水)；

(3)測序試劑：4.4μLBigDyemix(Bigdye、5×seq)、5μLEDTA、60μL 乙醇溶液(100％)、200μL乙醇溶液(70％)、16μLHi-Di。

作為本發明的一種優選技術方案，所述試劑盒保存于-20℃，盡量減少反復凍融的狀態下。

本發明還提供一種基于利尿劑個體化用藥基因檢測試劑盒的檢測方法，具體步驟如下：

(1)提取樣本的基因組DNA；

(2)NPPA(455TC)位點區域PCR擴增；