[發明專利]一種銀杏體細胞胚誘導及植株再生的方法

有效

• 申請號: 202010510469.5
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111557244B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 劉鵬飛;張云龍
• 申請（專利權）人: 張憲青;張云龍
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 青島易維申知識產權代理事務所(普通合伙) 37310
• 代理人: 于正友

本發明涉及一種銀杏體細胞胚誘導及植株再生的方法，屬于植物繁殖技術領域。上述方法包括：步驟1：銀杏幼葉的選取及消毒滅菌處理；步驟2：胚性愈傷組織的誘導；步驟3：胚性愈傷組織的增殖：將誘導出的愈傷組織切成5×5mm²塊狀，依次接種于激素濃度由高到低的繼代培養基中培養；步驟4：胚性愈傷組織的保持；步驟5：體細胞胚的發育；步驟6：體細胞胚的成熟；步驟7：體細胞胚的萌發。本發明通過自主研發的體細胞胚誘導方法，成功誘導出了胚狀體并萌發發育成苗。

技術領域

本發明涉及植物繁殖技術領域，具體提供一種銀杏體細胞胚誘導及植株再生的方法。

背景技術

銀杏是最為古老的“孑遺植物”之一，在植物界有“活化石”之稱，在中國被當作“寶樹”。其樹姿、葉形、葉色獨具美感，是城市綠化中不可缺少的觀賞樹種。而材質優良、宜加工，兼具特殊藥香，成為木材市場高級用材的代表。銀杏中的黃酮類、萜內酯等活性成分，具有抗衰老、提高免疫機能、防治心血管疾病的作用，被廣泛應用于醫用制劑、保健食品及化妝品等。市場對銀杏葉、果及苗木的需求與日俱增，然而銀杏作為雌雄異株的裸子植物，生長周期長，繁殖效率低，種子、嫁接、扦插等傳統繁殖方式受時間、環境、材料等限制，難以實現優良苗木快速而穩定的生產，致使銀杏市場一直處于供不應求的狀態。因此應用生物技術改良品種和進行優良品種的快繁前景都十分廣闊。

植物的體細胞胚胎發生，是指單倍體或者二倍體的體細胞在特定條件下，未經性細胞融合而通過與合子胚胎發生類似的途徑，發育出新個體的形態發生過程。與器官發生相比，體細胞胚胎發生具有顯著的特點：①具有兩極性：在體細胞胚發生早期就具有胚根和胚芽兩極，而不定芽和或不定根都是單向極性。②存在生理隔離：體細胞胚形成后與母體植物或外植體的維管束系統聯系較少，很容易與原組織分離。體細胞胚處于相對獨立的狀態，可通過根端或類似胚柄的結構從外植體或愈傷組織中吸取營養，在適宜條件下長成一個獨立的植株。③遺傳的穩定性：胚狀體起源于單細胞或者細胞團，在其產生和發育的過程中，一旦形成即通過了分化過程，結構即穩定，無需長時間的脫分化和再分化過程，細胞變異的頻率較低，成苗率較高，遺傳穩定性好。④發生數量大：增殖率高植物胚狀體形成后，在適宜的條件下還可再生胚狀體，即形成大量次級胚狀體。⑤重演受精卵形態發生的特性。植物組織培養中形態發生的幾種方式，雖然都是植物細胞全能性的具體表現，但體細胞胚胎發生途徑是細胞全能性表達最完全的一種方式，它不僅表明植物體細胞具有全套遺傳信息，而且重演了合子胚形態發生的進程。

銀杏通過愈傷組織進行快繁時，除銀杏胚愈傷組織能誘導出不定芽外，其它器官難以分化。在銀杏胚的研究方面，關于胚的成苗和成熟胚愈傷組織的誘導報道較多，而同時研究不同生長時期的胚的愈傷組織誘導及分化的研究尚鮮見報道。20世紀90年代國內外學者先后采用不同的外植體，如花粉、雌配子體、未成熟胚、成熟胚，成功的誘導出胚狀體，但胚狀體不能繼續萌發，最多也只是停留在顯微結構上的子葉型胚，最大只有1mm便不再生長而褐化死亡。

發明內容

為解決現有技術中存在的問題，本發明提供一種銀杏體細胞胚誘導及植株再生的方法，本發明通過自主研發的體細胞胚誘導方法，成功誘導出了胚狀體并萌發發育成苗。

為解決上述技術問題，本發明提供技術方案如下：

本發明提供一種銀杏體細胞胚誘導及植株再生的方法，包括：

步驟1：銀杏幼葉的選取及消毒滅菌處理：以銀杏無病害幼葉為外植體材料；

步驟2：胚性愈傷組織的誘導：將外植體切割成3×3cm小片，接種至愈傷組織誘導培養基；

所述愈傷組織誘導培養基為MK+6-10mg/L 2,4-D+3-6mg/L BA+400mg/L CH+400mg/L谷氨酰胺；

步驟3：胚性愈傷組織的增殖：從誘導出的愈傷組織中挑選生長旺盛，顏色略黃，表面突起的胚性培養物，切成5×5mm²塊狀，依次接種于激素濃度由高到低的繼代培養基中培養；