[發(fā)明專利]一種大西洋鮭魚特異性正反向引物及探針、檢測試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010505562.7
• 申請日: 2020-06-05
• 公開（公告）號: CN111635948A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙盼盼;高嵩;董井泉;王蕾;董宇;楊瀟含;陳仕琦
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇海洋大學(xué);連云港海恒生化科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京和聯(lián)順知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11621
• 代理人: 閆超良

本發(fā)明涉及檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種大西洋鮭魚特異性正反向引物及探針、檢測試劑盒及其應(yīng)用，該檢測試劑盒包含正反向引物及探針、側(cè)流層析試紙條，所述反向引物5'端用生物素進(jìn)行標(biāo)記；所述探針5'端用Fluorescein Isothiocyanate(FITC)標(biāo)記，中間區(qū)域C堿基用[THF]進(jìn)行替換，3'端用C3?spacer進(jìn)行末端封閉。本發(fā)明使用RPA?LFS(The isothermal recombinase polymerase amplification and the lateral flow strip)方法能夠在不依賴儀器設(shè)備的非實驗室環(huán)境下，實現(xiàn)實時、實地、即時的快速現(xiàn)場檢測，且準(zhǔn)確率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種大西洋鮭魚特異性正反向引物及探針、檢測試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

大西洋鮭(Salmo salar，S.salar)，又稱三文魚。形似梭子，體表有很多圓形斑點，屬冷水魚，最佳的生長水溫為12～18℃。主要攝食肉類，和淡水魚相比其營養(yǎng)價值更加豐富，富含脂肪、蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)、氨基酸、以及脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)等。大西洋鮭不僅營養(yǎng)價值高而且味道鮮美，因此頗受消費者喜愛。目前，大西洋鮭的供給主要通過海水養(yǎng)殖，并且以放在網(wǎng)箱內(nèi)養(yǎng)殖為主，以保證最佳的海水流速(2～30cm/s)和含氧量(6mg/L)。但人工養(yǎng)殖難度大、產(chǎn)量低、售價高。因此，不良商家利用形態(tài)相似的淡水魚，如虹鱒魚，輔以色素加工處理，使原本為白色、青色的虹鱒肉呈現(xiàn)出類似大西洋鮭的橘紅色澤和紋理，冒充大西洋鮭提供給消費者，嚴(yán)重侵害消費者權(quán)益。而且，生食淡水條件下養(yǎng)殖魚會引起寄生蟲感染的風(fēng)險，生食極易引發(fā)食品安全問題。

現(xiàn)有的通常對于大西洋鮭魚的檢測是利用分子手段進(jìn)行檢測，如：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)、DNA條形碼、實時熒光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR，qPCR)、環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(Loop-mediated isothermal amplificationmethod，LAMP)技術(shù)等，這些通常需要昂貴的儀器設(shè)備及具備專業(yè)技能的實驗人員，成本較高；近年由于重組酶聚合酶等溫擴(kuò)增技術(shù)(RPA技術(shù))、側(cè)流層析試紙條檢測技術(shù)(LFS)的興起，本發(fā)明通過RPA-LFS技術(shù)快速鑒別大西洋鮭魚，為保障消費者權(quán)益提供便捷的鑒定方法帶來新的技術(shù)參考。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的分子手段檢測需要昂貴的儀器設(shè)備及具備專業(yè)技能的實驗人員，成本較高的缺點，而提出的一種大西洋鮭魚特異性正反向引物及探針、檢測試劑盒及其應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一種大西洋鮭魚特異性正反向引物及探針，其正向引物和反向引物分別為S.salar-F、S.salar-R，所述正向引物序列為AGGCAGGGCTGGACGAGGCAGGGCAGGAAGCTCTG，所述反向引物序列為Biotin-TTGCAGCTGATGGAAGGTTTATTGGTTTAGTGCGA，所述探針為S.salar-P，且探針序列為FITC-GTCACAGGGATAGGACAAGAACTGGAAACTT[THF]CATTTGAAGCAGAGT-/C3-spacer/。

本發(fā)明還涉及一種大西洋鮭魚特異性的檢測試劑盒，其包含正反向引物及探針、側(cè)流層析試紙條，所述反向引物5'端采用生物素進(jìn)行標(biāo)記，所述探針5'端采用FluoresceinIsothiocyanate標(biāo)記，且中間區(qū)域C堿基采用[THF]進(jìn)行替換，3'端用C3-spacer進(jìn)行末端封閉。

優(yōu)選地，所述正反向引物長度為35bp。

優(yōu)選地，所述探針長度為46bp。

優(yōu)選地，所述檢測試劑盒包括核酸提取試劑及RPA擴(kuò)增試劑。

優(yōu)選地，所述RPA擴(kuò)增試劑為重組酶聚合酶。