[發(fā)明專利]一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010501704.2
• 申請(qǐng)日: 2020-06-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111624352B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王釗;龐傅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 柏榮診斷產(chǎn)品（上海）有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/58
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

1.一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，包括試劑1和試劑2，所述試劑1為反應(yīng)緩沖液，所述試劑2為NGAL抗體致敏膠乳溶液，其特征在于，所述試劑1與所述試劑2的混合物中含有人白蛋白和人IgG；

所述試劑1與所述試劑2的混合物中，人白蛋白終濃度不低于10000/x?mg/L，人IgG終濃度不低于2000/x?mg/L；其中x為待檢測(cè)樣品在所述試劑1與所述試劑2的混合物中的稀釋倍數(shù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述人白蛋白添加于所述試劑2中，所述人IgG添加于所述試劑1中。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑1中除人IgG外，還包括：試劑1緩沖液，電解質(zhì)，表面活性劑，防腐劑，促凝劑和阻斷劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑1中除人IgG外，還包括：pH6.8-7.5的100mM?Hepes-NaOH背景緩沖溶液，氯化鈉23.38-116.88g/L，吐溫-205-20mL/L，proclin-300防腐劑0.35mL/L，聚乙二醇60005-15g/L，Scantibody?HBR-26阻斷劑或菲鵬生物E-015阻斷劑2-2.5mL/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑2中除人白蛋白外，還包括：試劑2緩沖液，膠乳顆粒，抗體，表面活性劑，防腐劑和封閉劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑2中除人白蛋白外，還包括：pH7.6-8.2的50mM?Taps-NaOH背景緩沖液，羧基膠乳3g/L，NGAL兔多克隆抗體5mL/L，吐溫-20?6mL/L，proclin-300防腐劑0.35mL/L，牛血清白蛋白1g/L；所述NGAL兔多克隆抗體選用Dako公司貨號(hào)為OA995、濃度為5mg/mL的NGAL兔多克隆抗體。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑2的制備包括如下步驟：

(1)將抗體與膠乳顆粒共價(jià)偶聯(lián)，先不進(jìn)行封閉，獲得膠乳溶液；

(2)向所述膠乳溶液中加入尿素，使膠乳溶液中尿素終濃度為10-20mM/L，37℃下120rpm恒溫孵育1h，獲得膠乳試劑；

(3)將步驟(2)獲得的膠乳試劑中50％背景溶液棄去，換為支架溶液；

所述支架溶液為中部酸性、兩端含半胱氨酸的環(huán)肽的氨基酸支架溶解于支架溶解液中制得；

所述氨基酸支架結(jié)構(gòu)如式I所示，式中K為賴氨酸，C為半胱氨酸，X為3-4個(gè)自由組合的酸性氨基酸；

所述氨基酸支架的用量為：每mg抗體對(duì)應(yīng)0.010-0.020mg氨基酸支架；

(4)向步驟(3)獲得的混合有氨基酸支架的膠乳試劑中滴加50mmol/L的過(guò)硫酸鉀溶液，于37℃下120rpm恒溫孵育30min；所述過(guò)硫酸鉀的摩爾量為步驟(2)中尿素用量的35-50％；

(5)對(duì)步驟(4)孵育后的膠乳試劑離心，棄去所有上清，加入封閉清洗液進(jìn)行封閉清洗，制得試劑2。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述支架溶解液為100mM/L?pH7.5，含0.1％v/v吐溫-20的PBS緩沖液；所述過(guò)硫酸鉀溶液為使用所述支架溶解液對(duì)過(guò)硫酸鉀溶解獲得；所述封閉清洗液成分包括：pH7.6-8.2的50mM?Taps-NaOH背景緩沖液，吐溫-20?6mL/L，proclin-300防腐劑0.35mL/L，牛血清白蛋白1g/L；并且添加有人白蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種高準(zhǔn)確性尿液中NGAL檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述步驟(5)中，對(duì)步驟(4)孵育后的膠乳試劑離心，棄去所有上清，加入封閉清洗液復(fù)溶，使膠乳終濃度為1-4g/L，室溫混勻2小時(shí)，制得試劑2。