[發明專利]一種檢測牛生育能力的方法

有效

• 申請號: 202010501452.3
• 申請日: 2020-06-04
• 公開（公告）號: CN111596074B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 金義達
• 申請（專利權）人: 昆明天沃生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;蔣文睿

1.一種檢測牛生育能力的方法，其特征在于包括下列步驟：

1）收集母牛的晨尿或在上次小便后1-2小時再小便的尿液1-10ml；

2）將牛的促卵泡生成素FSH檢測試紙插入步驟1）的尿液中5-10秒，取出，于15-18分鐘后，觀察該檢測試紙中的質控線C與檢測線T是否顯色：

3）顯色結果如下：

試紙質控線C未顯色、檢測線T顯色，表明檢測結果無效，需要重新檢測；

試紙質控線C顯色，檢測線T未顯色，僅表明牛的促卵泡生成素FSH水平正常，需要隔日檢測；

試紙質控線C及檢測線T都顯色，用該顯色與FSH比色卡進行下列對比；

當FSH＜5mIU/ml，表明牛生育能力正常；

當FSH為5-10mIU/ml，表明牛生育能力下降；

當FSH＞10mIU/ml，表明牛無生育能力；

步驟2）牛的促卵泡生成素FSH檢測試紙經過下列方法制備：

21）按下列制備各組分：

金溶液：將質量濃度為1%的氯金酸溶液2ml和質量濃度為1%的檸檬酸鈉加入純化水至100ml，加熱至溶液呈現紫紅色后，冷卻至室溫，得金溶液；

封閉液：將0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul純化水中，加入30ul?碳酸鉀溶液，混合均勻，得330ul封閉液；

樣本墊處理液：將0.605g三羧甲氨基甲烷和1.5g氯化鈉完全溶解在100ml純化水中，得樣本墊處理液；

膠體金結合物稀釋液：將0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化鈉，0.5g牛血清白蛋白，3ml羊血清，0.15ml吐溫20，與100ml純化水混合均勻，得膠體金結合物稀釋液；

FSH包被液：將100-200mg牛的促卵泡生成素單克隆α亞級抗體FSHmAbCoating、質量濃度為1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01M?PBS緩沖液100ml中，混合均勻，得FSH包被液；

IgG包被液：將羊抗鼠IgG抗體100mg和質量濃度為1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01MPBS緩沖液100ml中，混合均勻，得IgG包被液；

22）在底板上劃膜

22A）將NC膜貼在PVC板上表面的中部，得底板；

22B）用XYZ3010噴金劃膜儀，并按0.8μl/cm的量，以500mm/s的速度，將IgG包被液均勻地劃在步驟22A）底板上的NC膜的上端作為質控線C，將FSH包被液均勻地劃在NC膜的下端作為檢測線T，質控線C與檢測線T相距6mm±1mm，質控線C距離NC膜上端8mm±1mm，檢測線T距離NC膜下端7mm±1mm，然后放入干燥箱內，于溫度為25℃±2℃、濕度≤30％下干燥18h±2h，得劃膜板；

23）金墊制備

23A）在100ml步驟21）的金溶液中加入1.2ml?碳酸鉀溶液和1.5-2mg?LHmb2，攪拌40min，滴加330ul封閉液，攪拌10min，于4℃、12000r/min的條件下離心40min，直至上清液變為水，棄上清液，取余液5.3?ml，加入40ml?膠體金結合物稀釋液混勻；

23B）將40ml膠體金結合物稀釋液均勻鋪在1080cm²玻璃纖維素膜RB65上，然后放入干燥箱內，于溫度為25℃±2℃、濕度≤30％下干燥18h±2h，得金墊；

24）樣本墊制備

24A）按30ml/張的量，將步驟21）的樣本墊處理液均勻鋪在玻璃纖維素膜SB06上，然后放入干燥箱內，于溫度為25℃±2℃、濕度≤30％下干燥18h±2h，得樣本墊；

25）貼板

25A）將步驟23）的金墊貼于步驟22B）劃膜板的NC膜下端，并使1-2mm的金墊后端搭在NC膜上；

25B）將步驟24）的樣本墊貼于步驟25A）的金墊前端上面，并使樣本墊后端完全搭在金墊上，樣本墊前端貼于PVC板前端；

25C）將吸水墊貼于25B）的PVC板后端，并使1-2mm的吸水墊前端搭在NC膜后端；

26）將步驟25C）貼板切割成3.0±0.5mm的試紙條，得牛的促卵泡生成素FSH檢測試紙。