[發明專利]一種液相色譜-串聯質譜法測定血漿中拉西地平濃度的方法

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• 申請號: 202010500635.3
• 申請日: 2020-06-04
• 公開（公告）號: CN111595977A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 祁慧昕;孫葉;顧琴
• 申請（專利權）人: 蘇州必宜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
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本發明公開了一種液相色譜?串聯質譜法測定血漿中拉西地平的方法，屬于藥物分析技術領域。本發明建立了液相色譜?串聯質譜法測定人血漿中拉西地平濃度的方法，血漿樣品以沉淀蛋白法處理后，采用Luna PFP色譜柱快速梯度洗脫色譜分離，經串聯四極桿質譜儀檢測。質譜監測離子反應為m/z 473.5→354.3（拉西地平）和m/z 481.4→362.3（拉西地平?¹³C₈）。采用本發明的方法可以實現對血漿中拉西地平的快速、靈敏檢測，可以應用于拉西地平仿制藥的生物等效性研究。

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，具體涉及一種液相色譜-串聯質譜法測定血漿中拉西地平濃度的方法。

背景技術

拉西地平（Lacidipine，Lac）為第三代二氫吡啶類鈣拮抗劑，其降壓作用溫和持久，用量少，副作用小，臨床上將其列為治療輕、中度原發性高血壓（EH）的首選藥物之一。

拉西地平仿制藥研發過程中需要進行臨床生物等效性研究，對比仿制藥物和原研藥物在人體內暴露量及吸收程度。因此需要測定血液中拉西地平的濃度。拉西地平臨床用藥量為每日4-8mg，服用4mg后單次給藥的達峰濃度為2-8ng/ml，但現有的檢測方法的靈敏度較差，受限于檢測方法靈敏度，臨床研究中常常通過增加藥物劑量的方法，提升藥物在血液中的濃度，進而獲得完整的藥物動力學參數。藥物劑量的提升容易對受試者的身體造成不良影響。另外現有方法也存在操作復雜、需要耗時的濃縮步驟、分析時間長、信噪比不佳等特點。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種靈敏的液相色譜-串聯質譜法測定血漿中拉西地平的方法。采用本發明的方法可以實現對血漿中拉西地平靈敏、快速檢測；而且血漿用量少，樣品前處理簡單。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種液相色譜-串聯質譜法測定血漿中拉西地平濃度的方法，包括如下步驟：

（1）對血漿樣品進行前處理；

（2）采用液相色譜-串聯質譜法測定步驟（1）中經前處理后的血漿樣品中拉西地平的濃度；

所述液相色譜-串聯質譜法包括色譜條件和質譜條件，其中：

所述色譜條件包括：以體積百分數為0.005%的甲酸水溶液作為流動相A，以乙腈作為流動相B，梯度洗脫，在0min時，流動相A：流動相B體積比為20:80，在0.6min時，流動相A：流動相B體積比為50:50，在1.5min時，流動相A：流動相B體積比為75:25，在2.4min時，流動相A：流動相B體積比為45:55，在3.2min時，流動相A：流動相B體積比為25:75，在3.5min時，流動相A：流動相B體積比為20:80；流速0.6mL/min。

所述質譜條件包括：離子源：電噴霧電離正離子檢測；噴霧氣溫度：500℃；霧化氣：65 psi；氣簾氣：35 psi；碰撞氣：9 psi；電離電流：3.0 μA；掃描時間：200 ms；掃描方式：多反應監測。用于定量的離子反應分別為：m/z 473.5 → 354.3（拉西地平）和m/z 481.4→362.3（拉西地平-¹³C₈）；碰撞能量20 eV。

優選的，步驟（1）中，對血漿樣品進行前處理的方法為：向50 μL血漿樣品中加入50μL內標溶液，再加入400 μL的乙腈，渦流振蕩10min，4℃條件下以3900 rpm速度離心10min，將離心后的上清液轉移至另一96孔板中。

更優選的，所述內標溶液為50 ng/mL的拉西地平-¹³C₈溶液，溶劑為體積比50:50的甲醇：水混合液。