[發明專利]煙草NtDREB-1BL1轉錄因子及其應用

有效

• 申請號: 202010500320.9
• 申請日: 2020-06-04
• 公開（公告）號: CN111533794B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 王燃;魏攀;王宇博;董臣;金立鋒;李鋒;張梅;謝小東;李澤鋒;鄭慶霞;王晨
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;C12N15/82;A01H5/12;A01H6/82
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

1.煙草NtDREB-1BL1轉錄因子在煙草色素調節中的應用，其特征在于，該轉錄因子定位于煙草葉片細胞的細胞核內，通過與煙草內NtPSY基因上游啟動子序列結合來實現對煙草內NtPSY基因表達量的調控，從而影響葉片內色素類物質含量變化；并且所述煙草NtDREB-1BL1轉錄因子表達量與色素類物質含量呈現正相關關系；

所述色素類物質為葉綠素a、葉綠素b、總葉綠素和類胡蘿卜素；

所述煙草NtDREB-1BL1轉錄因子的CDS堿基序列如SEQ ID No.1所示。

2.利用煙草NtDREB-1BL1轉錄因子的煙草新品種培育方法，其特征在于，通過構建重組載體，并轉化煙草后，篩選獲得色素類物質含量明顯變化的煙草新品種；

所述煙草NtDREB-1BL1轉錄因子表達量與色素類物質含量呈現正相關關系；

所述色素類物質為葉綠素a、葉綠素b、總葉綠素和類胡蘿卜素；

所述煙草NtDREB-1BL1轉錄因子的CDS堿基序列如SEQ ID No.1所示；

所述重組載體包括利用VIGS技術構建的基因沉默載體pTRV2-DREBL1；采用超表達技術結合Sup1300-GFP載體構建的超表達重組載體Sup1300-DREBL1-OE；利用RNAi技術構建的RNAi-DREBL1；具體構建時，

構建基因沉默載體pTRV2-DREBL1，擴增保守區域時，具體引物序列如下：

TRV-DREB1-F：5’-CGGGATCCGGACCCACTTGCTGAATATT-3’，

TRV-DREB1-R：5’- GCGGTACCTAACATTAGTCCTTCTGCCAT-3’；

構建超表達重組載體Sup1300-DREBL1-OE時，引物序列設計如下：

DREBL1-OE-F：5‘-GCTCTAGAATGGATATCTTTAGAAGCTATTATTC-3’，

DREBL1-OE-R：5‘-GGTACCGATAGAATAACTCCACAAAGGC-3’；

構建RNAi載體RNAi-DREBL1時，設計RNAi載體引物序列如下：

DREBL1-RNAi-attB-F：

5’-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTGCTATTATTCGGACCCACTTGC-3’，

共用RNAi-attB-R：

5’-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTAGAACGGCCCCTTAATGCAAT-3’。