[發明專利]嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A在制備細胞凋亡模型中的應用

有效

• 申請號: 202010499247.8
• 申請日: 2020-06-04
• 公開（公告）號: CN111607558B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 李艷;王鑫;尚學義;曾雄飛;嚴勇
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院第五醫學中心
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N15/31;C07K14/195
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 魏少偉

本發明公開了嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A在制備細胞凋亡模型中的應用。本發明發現嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A可以誘導細胞的凋亡，嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A處理細胞后，采用流式細胞學和形態學(電鏡)結果證實嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A能夠誘導細胞發生凋亡，嗜麥芽窄食單胞菌OmpA可以上調線粒體內凋亡蛋白的表達，下調抗凋亡蛋白的表達水平，即嗜麥芽窄食單胞菌OmpA可以使凋亡蛋白Bax表達上調，抗凋亡蛋白Bcl?xL表達下調，引起線粒體的膜通透性發生改變，Cyt c和AIF進入胞漿，繼而通過激活凋亡元件Caspase?3,開啟細胞凋亡線粒體途徑。

技術領域

本發明涉及生物技術領域中，嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A在制備細胞凋亡模型中的應用。

背景技術

嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)屬于非發酵革蘭陰性菌，廣泛分布于自然界，也寄居于人體呼吸道及糞便中，是臨床常見的條件致病菌。嗜麥芽窄食單胞菌作為一種機會致病菌，盡管其毒力不強，但?？稍诿庖吡Φ拖碌娜巳褐幸饑乐氐暮粑栏腥炯捌渌飨到y感染，如血流感染、腦膜炎、心內膜炎、軟組織感染、關節炎及泌尿道感染。嗜麥芽窄食單胞菌感染的危險因素包括，惡性腫瘤、有創醫療操作的使用、慢性呼吸系統疾病、廣譜抗生素的使用、長期住院、免疫力低下或免疫抑制劑的使用等，近年來，嗜麥芽窄食單胞菌引起的醫院感染呈逐年上升趨勢。

外膜蛋白(outer membrane protein，OMP)是存在于革蘭陰性菌中的特殊蛋白質，位于細胞膜表面或鑲嵌于細胞膜，外膜蛋白除具有免疫原性外，與細菌的致病性密切相關。外膜蛋白A為革蘭陰性菌的主要外膜蛋白，與疾病的發生及機體免疫密切相關。嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A(OmpA)是其外膜蛋白中數量最多的外膜蛋白。

細胞凋亡是細胞主動死亡的過程,涉及基因的激活、表達和調控等事件。細胞凋亡的途徑包括線粒體凋亡途徑和死亡受體介導途徑及溶酶體凋亡途徑等。

發明內容

本發明要解決的技術問題是如何制備細胞凋亡模型。

本發明首先提供了細胞凋亡模型的制備方法，所述方法包括：利用嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A(記為SmltompA)處理細胞，得到細胞凋亡模型。

上述方法中，所述嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白A可為如下A1)、A2)或A3)：

A1)氨基酸序列是序列1的蛋白質；

A2)將序列表中序列1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；

A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質。

為了使A1)中的蛋白質便于純化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如下表所示的標簽。

表：標簽的序列

上述A2)中的蛋白質，為與序列1所示蛋白質的氨基酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的蛋白質。所述具有75％或75％以上同一性為具有75％、具有80％、具有85％、具有90％、具有95％、具有96％、具有97％、具有98％或具有99％的同一性。

上述A2)中的蛋白質可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。

上述A2)中的蛋白質的編碼基因可通過將序列2所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上上表所示的標簽的編碼序列得到。其中，序列2所示的DNA分子編碼序列1所示的蛋白質。