[發明專利]中樞神經系統感染病原體檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010498327.1
• 申請日: 2020-06-04
• 公開（公告）號: CN111763767A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 夏小凱;程魯向;程天齡;杜金鳳;董江鍇;喬豪先
• 申請（專利權）人: 上海捷諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12Q1/14;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/93;C12R1/21;C12R1/46;C12R1/01;C12R1/36;C12R1/445
• 代理公司: 上海得民頌知識產權代理有限公司 31379
• 代理人: 傅云

1.一種中樞神經系統感染病原體檢測試劑盒，其特征在于，包括反應液、逆轉錄引物、緩沖液1、緩沖液2、反應酶、內部質控、陽性質控以及稀釋液，

所述逆轉錄引物包括依次對應人類腸道病毒、流感嗜血桿菌、EB病毒、肺炎鏈球菌、巨細胞病毒、無乳鏈球菌、單純皰疹病毒1型、單核細胞增多性李斯特菌、單純皰疹病毒2型、腦膜炎奈瑟菌、水痘帶狀皰疹病毒、雙埃可病毒、格特隱球菌、腮腺炎病毒、新生隱球菌、人皰疹病毒6型、大腸桿菌K1以及金黃色葡萄球菌的第一至第十八逆轉錄引物組，每個引物組均包括正向引物和反向引物，序列如SEQ ID NO.1～36所示；

所述緩沖液1和緩沖液2中分別包括用于熒光檢測的擴增引物組以及探針，

所述緩沖液1中包括依次對應人類腸道病毒、流感嗜血桿菌、EB病毒、肺炎鏈球菌、巨細胞病毒、無乳鏈球菌、單純皰疹病毒1型、單核細胞增多性李斯特菌、單純皰疹病毒2型、腦膜炎奈瑟菌、水痘帶狀皰疹病毒、雙?？刹《镜牡谝恢恋谑U增引物組以及第一至第十二探針，

所述緩沖液2中包括依次對應格特隱球菌、腮腺炎病毒、新生隱球菌、人皰疹病毒6型、大腸桿菌K1以及金黃色葡萄球菌的第十三至第十八擴增引物組以及第一探針、第三探針、第四探針、第六探針、第八探針和第九探針，

所述第一至第十八擴增引物組均分別包括正向引物和反向引物，序列如SEQ ID NO.37～72所示，所述第一至第十二探針序列如SEQ ID NO.73～84所示。

2.根據權利要求1所述的中樞神經系統感染病原體檢測試劑盒，其特征在于，

其中，所述反應液的規格為375μL，所述逆轉錄引物系統的規格為490μL，所述緩沖液1的規格為1050μL，所述緩沖液2的規格為1050μL，所述反應酶的規格為120μL，所述內部質控的規格為1000μL，所述陽性質控的規格為110μL，所述稀釋液的規格為1700μL，

每種試劑管的管蓋顏色不同。

3.根據權利要求2所述的中樞神經系統感染病原體檢測試劑盒，其特征在于，

其中，所述反應液包括儲存液和反應酶，所述儲存液與所述反應酶的體積比為3:1，所述反應酶的濃度為5.00U/μL；

所述逆轉錄引物系統包括435.4μL的0.1*TE稀釋液以及54.6μL的逆轉錄引物；

所述反應酶包括Taq酶以及DNA聚合酶；

所述內部質控包括濃度為10⁵pfu/μL的MS2噬菌體以及SMbuffer，MS2噬菌體溶液的體積百分比為0.1‰；

所述陽性質控包括超純水、100X EDTA緩沖液、10mg/μL herring sperm以及10⁵c/μL質控人工合成片段，該質控人工合成片段為十八個病原體保守區域片段，每支陽性質控管由104.94μL超純水、1.100μL EDTA緩沖液、0.110μL herring sperm以及3.85μL質控人工合成片段組成；

所述稀釋液為超純水，

所述內部質控中，MS2噬菌體的正、反向逆轉錄引物序列分別如SEQ ID NO.85和86所示，正、反向擴增引物序列分別如SEQ ID NO.87和88所示，探針序列如SEQ ID NO.89所示。