[發明專利]一種廣譜性有機磷農藥適配體及方法和應用

有效

• 申請號: 202010496777.7
• 申請日: 2020-06-03
• 公開（公告）號: CN111593054B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 黃玉坤;陶璇;陳祥貴;車振明;陳鵬飛;王力均;楊瀟
• 申請（專利權）人: 西華大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/53
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

本發明公開了一種廣譜性有機磷農藥適配體及方法和應用，該適配體的核苷酸序列為如SEQ.ID NO 7所示的序列。本發明的適配體，能夠識別多種有機磷農藥，且親和力均比現有適配體有所提高，而且S4?29僅具有29個堿基，序列較短，合成成本低，更有利于傳感器的構建，能夠應用于有機磷農藥檢測，檢測的農藥濃度范圍為0.001～100nM，而且甲拌磷、氧化樂果、丙溴磷的濃度與信號值呈良好的線性關系，檢測限分別為0.0016nM、0.0013nM、0.00125nM。

技術領域

本發明涉及一種適配體，具體涉及一種廣譜性有機磷農藥適配體及方法和應用。

背景技術

有機磷農藥是我國目前使用范圍最廣、用量最大的農藥，可分為劇毒、高毒、中毒、低毒四類，人體接觸少量的劇毒及高毒類即可中毒，且低毒類的大量進入體內亦可發生危害。因此，為保證人體的健康，建立高效、方便快捷的有機磷農藥殘留的檢測方法具有重要意義。

適配體是二十世紀九十年代發展起來的新型檢測元件，由DNA或RNA組成，通過折疊形成特定的三維結構，與靶標分子進行空間構象識別，具有高親和力和高特異性。適配體在有機磷農藥的檢測中，有機磷農藥是化學小分子，適配體結合有機磷農藥，多余的核酸序列可能形成復雜的高級構象，反而不利于適配體識別；過長的核酸序列也不利于檢測方法的構建，還增加合成成本。因此，更好的親和力適配體的選擇和核酸探針的合理設計是提高適配體的選擇性尤為重要，也有利于適配體傳感器的構建。

目前，張存政等人公開了基于分子信標的有機磷農藥適配體活性位點分析及改造，通過逐步切除兩條適配體二級結構中的莖環結構，通過比較分析其重要的莖環結構，截斷其余莖環結構，把兩條序列的重要結構重新組合形成一條新的適配體，序列長度由55個堿基截短至35個堿基，得到適配體S24，序列為5’-AGCTTGCTGCAGCGATTCTTGATCGCCACAGAGCT-3’，其二級結構為：

上述適配體的檢測原理主要是：在無靶標(農藥)存在時，分子信標(分子信標是一個簡單的發夾結構，與適配體部分互補配對，兩端分別攜帶熒光基團和熒光淬滅基團)與適配體互補配對，熒光強度較高；有靶標存在時，靶標與分子信標競爭結合適配體，熒光強度降低，與靶標濃度呈負相關。該檢測方法的檢測限為0.005mg/L，檢測范圍0.005-10.0mg/L。該方法實驗繁瑣、效率低，且截短后的適配體對部分農藥的親和力降低，而且檢測方法靈敏度低，檢測范圍較窄。

發明內容

本發明的目的是提供一種廣譜性有機磷農藥適配體及方法和應用，解決了現有適配體檢測靈敏度低的問題，能夠提高與農藥之間的親和力，靈敏度高，且檢測范圍寬。

為了達到上述目的，本發明提供了一種廣譜性有機磷農藥適配體，該適配體的核苷酸序列為如SEQ.ID NO 7所示的序列。

優選地，核苷酸序列為如SEQ.ID NO 7所示的適配體，其二級結構為：

本發明的另一目的是提供一種所述的適配體在檢測有機磷農藥方面的應用。

優選地，所述有機磷農藥的結構式為：

其中，A和A’各自獨立地選自短鏈的烷氧基、烷硫基、芳氧基和胺基中任意一種；R選自脂肪烴基或芳香烴基；X和Y各自獨立地選自O或S。

優選地，所述有機磷農藥包含：水胺硫磷、丙溴磷、甲拌磷和氧化樂果中任意一種或兩種以上。

本發明的另一目的是提供一種檢測有機磷農藥的方法，該方法包含：