[發明專利]人源化CCR2基因改造動物模型的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 202010492764.2
• 申請日: 2020-06-03
• 公開（公告）號: CN111690689B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 孫瑞林;王津津;慈磊
• 申請（專利權）人: 上海南方模式生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N15/85;C12N15/877;C12N5/10;C12N5/071;C12N15/12;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王闖

1.一種人源化CCR2基因改造動物細胞的構建方法，其特征在于，所述構建方法具體包括：提供人CCR2基因同源重組載體、sgRNA以及Cas9的混合物，所述Cas9包括Cas9 mRNA和/或Cas9蛋白，將所述混合物注射到小鼠受精卵細胞中，將所述小鼠受精卵細胞轉移至培養液中進行培養；

所述人CCR2基因同源重組載體包括從5’端到3’端依次排列的5’同源臂、人CCR2基因編碼區以及3’同源臂，所述5’同源臂為與小鼠Ccr2基因的第3號外顯子5’端同源的DNA片段，所述3’同源臂為與小鼠Ccr2基因的第3號外顯子3’端同源的DNA片段；

所述5’同源臂的DNA序列如SEQ ID NO：9所示，所述3’同源臂的DNA序列如SEQ ID NO：10所示，所述人CCR2基因編碼區的DNA序列如SEQ ID NO：11所示；

所述sgRNA在小鼠Ccr2基因的5’端靶位點和3’端靶位點均位于小鼠Ccr2基因的第3號外顯子上；

所述sgRNA靶向的5’端靶位點的序列如SEQ ID NO：21所示，所述sgRNA靶向的3’端靶位點的序列如SEQ ID NO：35所示。

2.一種人源化CCR2基因改造動物模型的構建方法，其特征在于，將如權利要求1所述的人源化CCR2基因改造動物細胞的構建方法得到的小鼠細胞移植至代孕母體內進行發育，得到F0代動物；

對F0代動物進行檢驗，獲得基因型鑒定正確的F0代陽性動物。

3.如權利要求2所述的人源化CCR2基因改造動物模型的構建方法，其特征在于，還包括：將所述F0代陽性動物通過雜交和自交的方式，擴大種群數量，同時雜合子小鼠自交獲得純合子小鼠，建立穩定的人源化CCR2基因改造小鼠品系。

4.如權利要求2-3中任一項所述的人源化CCR2基因改造動物模型的構建方法獲得的人源化CCR2基因改造動物模型、來源于所述人源化CCR2基因改造動物模型的細胞、細胞系或細胞培養物、組織、器官在與人CCR2基因或蛋白相關的應用；

所述應用包括人CCR2基因功能研究、人CCR2抗體研究、針對人CCR2靶位點的藥物制備和藥效研究中的至少一種。