[發明專利]一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法

在審

• 申請號: 202010489608.0
• 申請日: 2020-06-02
• 公開（公告）號: CN111849963A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 陳大為
• 申請（專利權）人: 濟南國益生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 濟南信在專利代理事務所(特殊普通合伙) 37271
• 代理人: 黃波

1.一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，制備步驟如下：(1)研磨，將動物組織病料于液氮下研磨至粉末，后將研磨后的動物組織病料超聲處理3次，處理條件為：功率350W，頻率26kHz，超聲時間5s，間歇1min；(2)裂解：向步驟(1)所得動物組織病料中加入裂解液一，用勻漿器處理得到勻漿液，向勻漿液中加入氯仿，并于8000r/min下離心，靜置分層得含有核糖核酸的料液；(3)吸附：向含有核糖核酸的料液加入含有磁珠的裂解液二，靜置，除去溶液得吸附有核糖核酸的磁珠；(4)清洗：將磁珠和洗滌液混合均勻，除去洗滌液，完成一次清洗，重復上述步驟3次以上；(5)洗脫：將經過清洗的磁珠至于洗脫液中，充分混合，除去磁珠得含有核糖核酸的洗脫液；(6)向洗脫液中加入乙醇和醋酸銨，充分攪拌后，靜置、過濾得核糖核酸。

2.如權利要求書1所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述步驟(2)所述的裂解液一為鹽酸胍、尿素、異硫氰酸銨、環己酮、醋酸鈉和水。

3.如權利要求書2所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述鹽酸胍、尿素、異硫氰酸銨、環己酮、醋酸鈉和水的質量比為90:50:110:15:11:1000。

4.如權利要求書1所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述步驟(2)的離心溫度為零下3℃。

5.如權利要求書1所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述步驟(3)所述的裂解液二為鹽酸胍、二硫蘇糖醇、碘化鈉、EDTA、甘油和水。

6.如權利要求書5所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述鹽酸胍、二硫蘇糖醇、碘化鈉、EDTA、甘油和水的質量比為83:151:17:5:167:1000。

7.如權利要求書1所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述步驟(5)洗脫液為鎢酸鈉、草酸鈉、2-(三氟甲基)苯并咪唑、氯化1-烯丙基-3-甲基咪唑、1-(2,4,6-三異丙基苯基磺酰)咪唑和水。

8.如權利要求書7所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述鎢酸鈉、草酸鈉、2-(三氟甲基)苯并咪唑、氯化1-烯丙基-3-甲基咪唑、1-(2,4,6-三異丙基苯基磺酰)咪唑和水的質量比為19:11:6:9:3:100。

9.如權利要求書1所述的一種用于動物病理組織核酸的快速提取方法，其特征在于，所述步驟(6)中乙醇、醋酸鈉和洗脫液的質量比為1:1:50。