[發明專利]一種比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針及其制備方法和其在肝腫瘤細胞靶向成像中的應用

有效

• 申請號: 202010486043.0
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN111533775B
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: 杜奎;盛力;沈潤溥;劉健;豐誠杰
• 申請（專利權）人: 紹興文理學院
• 主分類號: C07H19/056
• 分類號: C07H19/056;C07H1/00;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 深圳市沈合專利代理事務所(特殊普通合伙) 44373
• 代理人: 吳京隆

本發明公開了一種比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針及其制備方法和其在肝腫瘤細胞靶向成像中的應用。該比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針其結構式如式III所示：該比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針具有熒光量子產率高、比率計量型特點明顯和可實現肝腫瘤細胞靶向成像等優點。該熒光探針被成功應用于肝腫瘤細胞亮氨酸氨基肽酶靶向成像，并取得了較好的應用效果。

技術領域

本發明涉及熒光探針生物應用技術領域，特別涉及一種具有肝腫瘤細胞靶向能力的比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針及其制備方法和其在肝腫瘤細胞靶向成像中的應用。

背景技術

肝癌是常見的惡性腫瘤之一，具有病癥早期癥狀不典型、病勢發展迅速等特點，實現早期準確診斷可有效提高治愈率。亮氨酸氨基肽酶(LAP)作為一種重要的肝腫瘤標志物，廣泛分布于人體組織中，其活性變化與肝腫瘤細胞的生長、分裂和遷移密切相關。目前，血液中的亮氨酸氨基肽酶活性變化是臨床肝腫瘤早期診斷的參考指標之一。然而受非原位檢測的制約，通過血液途徑難以獲得肝腫瘤細胞LAP活性變化的準確數據。因此，迫切需要開發一種原位、高效的肝腫瘤細胞LAP活性檢測方法，為肝癌的早期診斷提供重要參考。

熒光成像技術具有原位檢測、時空分辨率高等優勢，已成為腫瘤標志物活性檢測的有力工具，性能優良的熒光探針是這一技術成功應用的關鍵。基于LAP水解探針N-端亮氨酸酰胺鍵實現熒光響應的原理，國內外研究人員設計了大量小分子LAP熒光探針，尤其是近紅外比率型LAP熒光探針的制備，為LAP活性檢測提供了重要工具。然而，實現肝腫瘤細胞LAP活性的準確檢測仍需解決熒光探針肝腫瘤細胞的靶向問題，目前有關具有肝腫瘤細胞靶向能力的LAP熒光探針尚未見報道。

發明內容

有鑒于此，本發明提出一種具有肝腫瘤細胞靶向能力的比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針；

本發明還提出一種具有肝腫瘤細胞靶向能力的比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針的制備方法；

本發明還提出具有肝腫瘤細胞靶向能力的比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針在肝腫瘤細胞靶向成像中的應用。

本發明的技術方案是：

本發明提供一種式III所示的比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針：

本發明還提供了一種比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針的制備方法。如圖1所示，所述制備方法為：將化合物I，Fmoc-Leu-OH，二異丙基乙胺，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺，1-羥基苯并三唑按照一定的摩爾比加入到二氯甲烷和DMF混合溶液(體積比1：1)中，25℃攪拌反應24h，反應液純化得到化合物II；所述化合物I，Fmoc-Leu-OH，二異丙基乙胺，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺，1-羥基苯并三唑摩爾比為0.5～1:2:2:2：2，優選為1:1.2:1.2:1.2:2；將化合物II，二甲胺四氫呋喃溶液按照一定比例加入到二氯甲烷溶液中，一定溫度下反應1h，反應液經過純化得到化合物III；所述化合物II，二甲胺四氫呋喃溶液按照摩爾比的比例為0.5～1.5:10，優選為1:8；反應溫度優選25℃～35℃。

本發明還提供了一種比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針應用于肝腫瘤細胞亮氨酸氨基肽酶靶向成像：采用共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)對式III熒光探針在HuH7和A549細胞熒光成像進行了研究。式III熒光探針(10μM)分別與HuH7和A549細胞共孵育30分鐘后，獲得熒光光譜成像，激發波長選擇405nm。

相對于現有技術，本發明提供的比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針具有以下優點：

該比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針具有明顯的比率計量型特點、水溶性好和可實現肝腫瘤細胞亮氨酸氨基肽酶靶向成像等優點。該熒光探針被成功應用于肝腫瘤細胞亮氨酸氨基肽酶靶向成像，并取得了較好的成像效果。

附圖說明

圖1為本發明的比率型亮氨酸氨基肽酶熒光探針的反應路線圖。