[發明專利]一種檢測血清中抗癡呆藥物濃度的方法

在審

• 申請號: 202010483959.0
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN111812224A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 成曉亮;李美娟
• 申請（專利權）人: 南京品生醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

1.一種檢測血清中抗癡呆藥物濃度的方法，

所述抗癡呆藥物分別為：美金剛、卡巴拉汀和多奈哌齊；

上述抗癡呆藥物對應的同位素內標物分別為：美金剛-d3、卡巴拉汀-d4和多奈哌齊-d7；

采用超高效液相色譜串聯質譜技術檢測經過預處理的血清中的上述抗癡呆藥物，先利用超高效液相色譜將目標待測物與血清基質中的干擾組分進行分離，再利用質譜同位素內標定量法，以標準品與內標物的濃度比為X軸，標準品與內標物的峰面積比為Y軸，建立校準曲線，計算血清中抗癡呆藥物的含量，具體色譜條件為：

(1)超高效液相色譜條件：

流動相A：0.001％～0.1％甲酸水溶液；流動相B：乙腈；

色譜柱型號：Thermo Scientific Hypersil BDS C18；

采用流動相A和流動相B為混合流動相進行梯度洗脫，所述梯度洗脫過程如下：在0.0-2.0分鐘內，流動相A和流動相B的體積比由92:8勻速漸變至40:60；在2.0-2.5分鐘內，流動相A和流動相B的體積比由40:60勻速漸變至5:95；在2.5-4.5分鐘內，流動相A和流動相B的體積比由5:95勻速漸變至92:8；每個樣品采集時間為4.5min；

(2)質譜條件：

在電噴霧電離檢測模式下，采用多反應監測的質譜掃描模式；噴霧電壓為3.0kV(ESI+)；源溫度為120℃；霧化氣溫度為400℃，霧化氣流速為800L/h，錐孔氣流速為150L/h；同時監測各目標物以及同位素內標。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述流動相A為0.01％～0.1％甲酸水溶液；流速為0.2～0.5mL/min；柱溫為30～50℃；進樣體積為0.2～10μL。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，

所述流動相A為0.01％甲酸水溶液；所述流速為0.4mL/min；所述柱溫為45℃；所述進樣體積為1μL。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述血清為人或動物血清。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述經過預處理的血清按照如下方法制備：向血清中加入混合內標工作液，渦旋后加入蛋白沉淀劑，再振蕩離心后取上清液；所述蛋白質沉淀劑為異丙醇、甲醇和乙腈混合溶液；優選地，所述蛋白質沉淀劑中異丙醇、甲醇和乙腈的體積比1:1～2:1～3；更優選地，所述蛋白質沉淀劑中異丙醇、甲醇和乙腈的體積比1:1:2。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，

所述經過預處理的血清按照如下方法制備：取50μL血清于1.5mL離心管中，向其中加入20μL混合內標工作液，渦旋后加入430μL蛋白沉淀劑，在12000～15000r/min，1～5℃離心4～10min后，轉移離心管中的上清液60μL至塑料內襯管中，待進樣；所述蛋白質沉淀劑中異丙醇、甲醇和乙腈的體積比1:1:2。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，

所述混合內標工作液按照如下方法制備：

將0.1mg/mL美金剛-d3同位素內標母液、0.1mg/mL卡巴拉汀-d4同位素內標母液和0.1mg/mL多奈哌齊-d7同位素內標母液以甲醇配制成包含有1000ng/mL美金剛-d3、1000ng/mL卡巴拉汀-d4和500ng/mL多奈哌齊-d7的混合內標溶液；

取100μL混合內標溶液，加入900μL甲醇，混合均勻得混合內標工作液。