[發明專利]一種與辣椒果實角質層缺乏基因連鎖的分子標記及應用有效
| 申請號： | 202010480619.2 | 申請日： | 2020-05-30 |
| 公開（公告）號： | CN111560459B | 公開（公告）日： | 2023-05-02 |
| 發明（設計）人： | 劉峰;謝玲玲;易婷;鄭井元;周書棟;馬艷青;戴雄澤;鄒學校 | 申請（專利權）人： | 湖南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410128 *** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 辣椒 果實 角質層 缺乏 基因 連鎖 分子 標記 應用 | ||
1.?一種與辣椒果實角質層合成基因連鎖的分子標記，其特征在于，為辣椒基因組12號染色體上200104484bp位置處發生的G向A的突變，所述的分子標記的引物包括兩條正向引物和一條反向引物，
正向引物X：CTTAGAAGGAGAGGCTGACAAGTG
正向引物Y：CTTAGAAGGAGAGGCTGACAAGTA；
反向引物：CGCTGACGAGAACTAGACATCTG；
所述的分子標記對應的基因型：G:G為具有果實角質層的基因型、A:G為具有果實角質層的基因型、A:A為不具有果實角質層的基因型。
2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于：兩條正向引物分別連接不同的熒光接頭序列為：
FAM：GAAGGTGACCAAGTTCATGCT；
HEX：GAAGGTCGGAGTCAACGGATT。
3.權利要求1-2任一項所述的分子標記的應用，其特征在于：用于鑒定和輔助篩選果實角質層缺乏型辣椒。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：用于果實角質層缺乏型辣椒突變體育種。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：采用PCR反應進行檢測。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：具體包括以下步驟：
(1)以待測樣品基因組DNA為模板，利用分子標記的擴增引物進行Touc-hdown?PCR擴增，獲得擴增產物；
(2)對擴增產物進行檢測與分析。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：對擴增產物進行熒光檢測時，若是G:G基因型，則判定為果實表面具有角質層的野生純合單株；若是A:A基因型，則判定為果實表面不具有角質層的突變純合單株；若是A:G基因型，則判定為果實表面具有角質層的雜合單株。
8.根據權利要求7所述的應用，采用Touchdown?PCR；
Touchdown?PCR擴增程序為：94℃15min；95℃20s；65℃-56℃60s，10個循環，每個循環退火延伸溫度降0.8℃；94℃20s；57℃60s，26個循環。
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