[發明專利]一種多穗柯總黃酮提取物的制備方法及質量檢測方法

在審

• 申請號: 202010475809.5
• 申請日: 2020-05-29
• 公開（公告）號: CN111595972A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 袁健童;劉布鳴;柴玲;陳明生;馮軍
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區中醫藥研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/90;G01N30/94;G01N21/33;A61P3/10;A61K36/185
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來光業

1.一種多穗柯總黃酮提取物的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）甲醇或乙醇溶液加熱回流提取：

①多穗柯干燥葉片，粉碎，按重量加5～20倍量體積濃度為50～90％的甲醇或乙醇；

② 在溫度為60～90℃條件下加熱回流提取2～4次，每次0.5～2.5h，濾過，合并濾液；

③ 濾液回收甲醇或乙醇，并濃縮至無醇味，加水稀釋至濃度為0.05～0.06g生藥量/ml的多穗柯提取液，待上柱用；

（2）大孔吸附樹脂分離純化：

① 選擇中等極性或非極性大孔吸附樹脂；

②吸附：上柱多穗柯提取液濃度為0.05～0.06g生藥量/ml，上柱多穗柯提取液體積為填充大孔吸附樹脂體積的8～16倍，上柱流速為1～4 BV/h；

③水沖洗：洗脫劑為水，洗脫劑用量為填充大孔吸附樹脂體積的1～3倍，洗脫流速為1～3BV/h，棄去洗脫液；

④ 乙醇溶液洗脫：洗脫劑為體積濃度30～90%的乙醇，洗脫劑用量為填充大孔吸附樹脂體積的10～20倍，洗脫流速為1～3BV/h，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，再進行真空干燥或者冷凍干燥，即得多穗柯總黃酮提取物。

2.根據權利要求1所述的多穗柯總黃酮提取物的制備方法，其特征在于：步驟（2）所述的大孔吸附樹脂為中等極性的XAD-18或非極性的XAD-1600N、D101大孔吸附樹脂。

3.根據權利要求1所述的多穗柯總黃酮提取物的制備方法，其特征在于：制得的多穗柯總黃酮提取物的總黃酮的含量以根皮苷計占提取物總重量的50%以上，其主要成分為具有二氫查爾酮結構母核的根皮苷、三葉苷及另兩種具有黃酮母核與根皮苷結構相似的未知化合物，此四種化合物共占多穗柯總黃酮成分的50%以上，根皮苷和三葉苷的含量占總黃酮成分的30%以上。

4.如權利要求1所述的多穗柯總黃酮提取物的質量檢測方法，其特征在于：多穗柯總黃酮的含量測定，采用紫外分光光度法，檢測步驟如下：

（1）對照品溶液的制備：精密稱取根皮苷對照品適量，加甲醇制成每1ml約含0.7mg的溶液，即得；

（2）標準曲線的制備：精密量吸取根皮苷對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分別置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以甲醇作為空白，照紫外-可見分光光度法在284± 2nm測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為Y =0.0376X+0.0252，r=0.9998；

（3）測定法：取多穗柯總黃酮提取物約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，以甲醇作為空白，在284± 2nm 測定吸光度，含總黃酮以根皮苷計算，不得少于50.0%。

5.如權利要求1所述的多穗柯總黃酮提取物的質量檢測方法，其特征在于：多穗柯總黃酮的含量測定采用高效液相色譜法，檢測步驟如下：

（1）色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30:70～90:10的甲醇A—0.1%甲酸水溶液B為流動相，梯度洗脫，洗脫梯度如下：0～2min，25%A→35%A；2～20min，35%A→90%A；流速為0.2～1 ml/min，檢測波長為284 nm；理論板數以根皮苷和三葉苷計均不低于3000；

（2）供試品溶液的制備：取多穗柯總黃酮提取物約16 mg，精密稱定，置100 ml的容量瓶中，加50%甲醇溶液適量超聲處理10min使溶解，處理功率320W，頻率80KHz，加50%甲醇溶液至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

（3）對照品溶液的制備：精密稱定根皮苷、三葉苷對照品適量，加甲醇制成每1ml約含根皮苷35μg、三葉苷16μg的混合對照品溶液，即得；

（4）測定法：分別精密吸取混合對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，以根皮苷、三葉苷為對照品采用外標法，分別計算根皮苷、三葉苷的總量不得少于30.0%。