[發明專利]可用于鑒別瘤牛和普通牛血統的基因組序列及其應用方法

有效

• 申請號: 202010475390.3
• 申請日: 2020-05-29
• 公開（公告）號: CN111455072B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 周揚;胡琰;夏晗;李明勛;葉挺柱;郭愛珍;楊利國
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 武漢江楚智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 42228
• 代理人: 鄧寅杰

1.序列如SEQ ID NO.1所示基因組序列在鑒別瘤牛和普通牛血統上的應用，瘤牛缺失所述基因組序列，普通牛正常；所述瘤牛指Nelore品種、Ndama品種和Muturu品種，所述普通牛指Holstein品種、Jersey品種、Angus品種和Hereford品種。

2.序列如SEQ ID NO.1所示基因組序列在牛品種純繁、改良和保種上的應用，瘤牛缺失所述基因組序列，普通牛正常；所述瘤牛指Nelore品種、Ndama品種和Muturu品種，所述普通牛指Holstein品種、Jersey品種、Angus品種和Hereford品種。

3.序列如SEQ ID NO.2所示基因組序列在鑒別瘤牛和普通牛血統上的應用，瘤牛缺失所述基因組序列，普通牛正常；所述瘤牛指Nelore品種、Ndama品種和Muturu品種，所述普通牛指Holstein品種、Jersey品種、Angus品種和Hereford品種。

4.根據權利要求3所述基因組序列在鑒別瘤牛和普通牛血統上的應用，其特征在于：所述基因組序列用于鑒別瘤牛和普通牛血統時采用的PCR引物序列為：正向引物如SEQ IDNO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示。

5.一種鑒別瘤牛和普通牛血統的分子生物學方法，其特征在于：包括：

1）從待鑒定牛的組織中分離提取DNA；

2）以步驟1）DNA為模板，用一對引物：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ IDNO.4所示，通過聚合酶鏈式反應PCR擴增；

3）取適量步驟2）擴增出的產物在1.5％瓊脂糖凝膠中電泳；

4）觀察步驟3）電泳結果，如果在1092bp處出現擴增條帶即可判斷所述待鑒定牛為普通牛，如果未出現相應的擴增條帶即可判斷所述待鑒定牛為瘤牛；

所述瘤牛指Nelore品種、Ndama品種和Muturu品種，所述普通牛指Holstein品種、Jersey品種、Angus品種和Hereford品種。

6.根據權利要求5所述鑒別瘤牛和普通牛血統的分子生物學方法，其特征在于：步驟2）中所述PCR擴增采用降落PCR，PCR條件為：94 ℃預變性4分鐘；94 ℃變性30s，68 ℃退火30s，72 ℃延伸1min，以后每個循環依次降低1 ℃，共18個循環；94 ℃變性30s，50 ℃退火30s，72 ℃延伸1min，22個循環；72 ℃延伸10min。