[發明專利]一種同時檢測番茄抗病基因Ty-1、Ty-3和Sw-5的引物組合及其多重PCR方法在審
| 申請號： | 202010475252.5 | 申請日： | 2020-05-29 |
| 公開（公告）號： | CN111575396A | 公開（公告）日： | 2020-08-25 |
| 發明（設計）人： | 楊亮;李菊;常偉;李志;苗明軍;李躍建 | 申請（專利權）人： | 四川省農業科學院園藝研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都玖和知識產權代理事務所(普通合伙) 51238 | 代理人： | 胡琳梅 |
| 地址： | 610000 *** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 同時 檢測 番茄 抗病 基因 ty sw 引物 組合 及其 多重 pcr 方法 | ||
1.一種同時檢測番茄抗病基因Ty-1、Ty-3和Sw-5的引物組合，其特征在于，由三對引物組合而成，所述引物分別如下：
檢測番茄抗病基因Ty-1的引物為：
正向引物如SEQ ID NO:1所示，反向引物如SEQ ID NO:2所示；
檢測番茄抗病基因Ty-3的引物為：
正向引物如SEQ ID NO:3所示，反向引物如SEQ ID NO:4所示；
檢測番茄抗病基因Sw-5的引物為：
正向引物如SEQ ID NO:5所示，反向引物如SEQ ID NO:6所示。
2.根據同時檢測番茄抗病基因Ty-1、Ty-3和Sw-5的引物組合的多重PCR方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)取番茄葉片，提取其基因組DNA；
2)以提取的番茄基因組DNA為模板，利用Ty-1、Ty-3和Sw-5基因的混合引物對，進行多重PCR反應，制得PCR產物；
3)將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，判斷Ty-1、Ty-3和Sw-5基因型。
3.根據權利要求1所述的多重PCR方法，其特征在于，步驟2)中，多重PCR反應體系的配置如下：采用10μL反應體系，包括1μL 10×Taq buffer，0.8μL 2.5mM dNTPs，4μL混合引物，0.4μL 2.5U/μL Taq DNA Polymerase，1μL DNA模板，2.8μL ddH2O。
4.根據權利要求1所述的多重PCR方法，其特征在于，步驟2)中，混合引物對包括Ty-1引物對、Ty-3引物對和Sw-5引物對，各引物對在PCR反應體系中的濃度如下：Ty-1引物對為100nM，Ty-3引物對為70nM，Sw-5引物對為150nM。
5.根據權利要求1所述的多重PCR方法，其特征在于，步驟2)中，多重PCR反應程序設置如下：95℃預變性3分鐘；95℃變性30秒，56℃復性30秒，72℃延伸1.5分鐘，共35個循環；隨后72℃終延伸7分鐘，PCR產物于4℃保存。
6.根據權利要求1所述的多重PCR方法，其特征在于，步驟3)中，瓊脂糖凝膠電泳包括以下步驟：將PCR產物在添加有0.1‰Golden View的1.5％瓊脂糖凝膠中進行電泳分離，電壓條件為120-140V，電泳時間45分鐘，電泳結束后在凝膠成像系統上觀察條帶。
7.根據權利要求2-6中任一項所述的多重PCR方法在檢測番茄抗病基因型上的應用。
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