[發(fā)明專利]一種同時(shí)檢測(cè)包括SARS-CoV-2的九種呼吸道病毒的檢測(cè)試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010469523.6
• 申請(qǐng)日: 2020-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111593142A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王海巖;張通;鄧雪萍;劉奕;李艷艷;陳旭;趙書(shū)清;張國(guó)寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東艾克韋生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 張貴賓

本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)檢測(cè)包括SARS?CoV?2的九種呼吸道病毒的檢測(cè)試劑盒，屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠狀病毒、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒229E亞型、冠狀病毒OC43亞型、冠狀病毒HKU1亞型的引物組和熒光探針，以及反應(yīng)液、酶混合液、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)包括新型冠狀病毒SARS?CoV?2在內(nèi)的九種常見(jiàn)呼吸道病毒的快速確認(rèn)與篩查，同時(shí)本發(fā)明使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，試劑盒具備靈敏度高，特異性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種同時(shí)檢測(cè)包括SARS-CoV-2的九種呼吸道病毒的檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)是在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來(lái)啟動(dòng)合成，通過(guò)一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補(bǔ)序列結(jié)合，形成部分雙鏈。在適宜的溫度和環(huán)境下，DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此為起始點(diǎn)，沿模板5′→3′方向延伸，合成一條新的DNA互補(bǔ)鏈。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量PCR原理是，當(dāng)探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成完全同步。

流感是由流感病毒引起的一種急性病毒性呼吸道感染，傳染性強(qiáng)，發(fā)病率高，其中甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒更強(qiáng)，癥狀更嚴(yán)重。2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是2019年在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。該病毒引起的癥狀一般為發(fā)熱、乏力、干咳、逐漸出現(xiàn)呼吸困難，嚴(yán)重者表現(xiàn)為急性呼吸窘迫綜合征，膿毒癥休克，難以糾正的代謝性酸中毒和凝血功能障礙。該病毒存在人傳人現(xiàn)象，病毒潛伏期一般為1～14天，潛伏期具有傳染性。

在成年人和兒童中，發(fā)熱伴呼吸道癥候群是最普遍的急性傳染病，對(duì)于患者和公共衛(wèi)生部門來(lái)說(shuō)，準(zhǔn)確快速診斷由哪種病毒引起的呼吸道感染十分重要。目前新型冠狀病毒相關(guān)檢測(cè)產(chǎn)品需求量較大，快速鑒別新型冠狀病毒感染抑或是其他常見(jiàn)呼吸道病毒感染成為臨床和公共衛(wèi)生部門亟需解決的問(wèn)題。

開(kāi)發(fā)一種快速便捷檢測(cè)多種呼吸道病毒的檢測(cè)試劑盒是亟需解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種同時(shí)檢測(cè)包括SARS-CoV-2的九種呼吸道病毒的檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明針對(duì)甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠狀病毒SARS-CoV-2、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒229E亞型、冠狀病毒OC43亞型、冠狀病毒HKU1亞型，開(kāi)發(fā)了呼吸道病毒多重檢測(cè)體系。能夠高效率、高特異性、低成本的對(duì)呼吸道病毒感染患者進(jìn)行檢測(cè)，有助于快速篩查新型冠狀病毒SARS-CoV-2感染患者和其他呼吸道病毒感染患者。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種同時(shí)檢測(cè)包括SARS-CoV-2的九種呼吸道病毒的檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠狀病毒SARS-CoV-2、鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒229E亞型、冠狀病毒OC43亞型、冠狀病毒HKU1亞型的引物組、探針組；

檢測(cè)甲型流感病毒的上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的序列如SEQID No.2所示，熒光探針的序列如SEQ ID No.3所示；