[發(fā)明專利]一種細(xì)胞病理學(xué)樣本的染色制片方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010467313.3
• 申請(qǐng)日: 2020-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112113820A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楚文江;王劍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 王劍
• 主分類號(hào): G01N1/30
• 分類號(hào): G01N1/30
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;李唐

本發(fā)明涉及一種細(xì)胞病理學(xué)樣本的染色制片方法。具體地，本發(fā)明涉及細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域的一種細(xì)胞免疫組化或/和顯色原位雜交的染色制片方法。該方法可以在細(xì)胞病理學(xué)細(xì)胞懸液樣本上，更有效更準(zhǔn)確地顯示一個(gè)或者多個(gè)特定生物標(biāo)志物的表達(dá)信息。染色結(jié)果適合在普通光學(xué)顯微鏡下觀察一個(gè)或者多個(gè)特定生物標(biāo)志物在細(xì)胞病理學(xué)樣本上的表達(dá)。本發(fā)明還涉及所述方法得到的細(xì)胞懸液和載有所述細(xì)胞懸液的病理切片。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域的一種細(xì)胞免疫組化或/和顯色原位雜交的染色制片方法。該方法可以在細(xì)胞病理學(xué)細(xì)胞懸液樣本上，更有效更準(zhǔn)確地顯示一個(gè)或者多個(gè)特定生物標(biāo)志物的表達(dá)信息。染色結(jié)果適合在普通光學(xué)顯微鏡下觀察一個(gè)或者多個(gè)特定生物標(biāo)志物在細(xì)胞病理學(xué)樣本上的表達(dá)。本發(fā)明還涉及所述方法得到的細(xì)胞懸液和載有所述細(xì)胞懸液的病理切片。

背景技術(shù)

細(xì)胞病理學(xué)主要是根據(jù)細(xì)胞內(nèi)異常狀況，研究疾病發(fā)生的原因、發(fā)病原理，以及疾病發(fā)生過(guò)程中，細(xì)胞的生理功能發(fā)生改變的規(guī)律，從而提出診斷和防治疾病的依據(jù)。臨床樣本涵蓋脫落細(xì)胞學(xué)、細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)、血液循環(huán)腫瘤細(xì)胞，其他細(xì)胞學(xué)（手術(shù)中的細(xì)胞學(xué)，骨髓、外周血細(xì)胞學(xué)，艾滋病細(xì)胞學(xué)等）。

細(xì)胞病理學(xué)常規(guī)染色方法包括巴氏（Papanicolaou）、瑞氏-吉姆薩 （Wright-Giemsa）等。目前最常用的是迪夫快速染色 （Diff-Quik）,其染液是采用世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的快速染色方法而配制，與瑞氏-吉姆薩類似都是利用巴氏技術(shù)原理改良而來(lái)的。染色結(jié)果可以顯示細(xì)胞膜的特點(diǎn)，比如細(xì)胞皺褶；細(xì)胞質(zhì)的粘液、脂肪顆粒、神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒；細(xì)胞核的特點(diǎn)，包括細(xì)胞核的形態(tài)和大小、核仁的數(shù)目和形狀、染色體數(shù)目、染色質(zhì)的質(zhì)地，為細(xì)胞病理學(xué)家提供細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷信息。

細(xì)胞病理學(xué)的常規(guī)工作流程是先對(duì)細(xì)胞樣本制作病理涂片，進(jìn)行常規(guī)染色，然后再進(jìn)行細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)診斷。隨著科學(xué)和技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞病理學(xué)家需要對(duì)細(xì)胞的蛋白或者核酸標(biāo)志物進(jìn)行免疫組化染色或者核酸顯色原位雜交染色，來(lái)進(jìn)一步幫助診斷、判斷預(yù)后，和選擇藥物。但是，目前細(xì)胞病理學(xué)樣本無(wú)法有效地進(jìn)行細(xì)胞免疫組化或者核酸顯色原位雜交染色。這個(gè)臨床痛點(diǎn)是由以下原因造成的：

1）細(xì)胞涂片在染色過(guò)程中處在一個(gè)開(kāi)放的環(huán)境，在染色過(guò)程中染色液體要不斷更換，沖洗，隨后丟棄。隨著對(duì)染色液和沖洗液的不斷更換和丟棄，會(huì)造成病理玻片上細(xì)胞樣本脫落而丟失，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。2）常規(guī)細(xì)胞病理學(xué)免疫組化染色和核酸顯色原位雜交以病理玻片為細(xì)胞樣本的載體，要求細(xì)胞樣本和病理玻片兩者直接緊密接觸，之間不能有間隙而導(dǎo)致細(xì)胞從玻片上脫落。但染色液因此也無(wú)法到達(dá)細(xì)胞和玻片接觸的位置，在細(xì)胞和玻片的接觸部位形成染色盲區(qū)，從而不能把細(xì)胞全方位充分染色，留有染色死角，影響染色結(jié)果的敏感性和準(zhǔn)確性。3）常規(guī)細(xì)胞病理學(xué)免疫組化染色和核酸顯色原位雜交以病理玻片為細(xì)胞樣本的載體，固定在病理玻片上的細(xì)胞邊緣不可避免會(huì)松脫而漂浮在染色液中，每次清洗不易將染色液完全清洗干凈，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞邊緣著色，形式所謂邊緣效應(yīng)，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，影響診斷的準(zhǔn)確性。

盡管免疫組化和顯色原位雜交染色成為組織病理學(xué)上已經(jīng)成為不可或缺的輔助染色，但因?yàn)橐陨系募夹g(shù)阻礙，細(xì)胞病理學(xué)上免疫組化和顯色原位雜交染色的應(yīng)用并沒(méi)有在臨床上廣泛應(yīng)用。因此，本領(lǐng)域還需要新的染色方法以克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決了對(duì)細(xì)胞懸液樣本進(jìn)行免疫組化或/和顯色原位雜交的技術(shù)困難，避免了染色過(guò)程中細(xì)胞樣本的丟失，適合少量細(xì)胞樣本的染色。染色過(guò)程在細(xì)胞上無(wú)死角無(wú)盲區(qū)，背景噪音低，避免了染色過(guò)程中的邊緣效應(yīng)，染色結(jié)果更敏感更準(zhǔn)確。適合在普通光學(xué)顯微鏡下觀察一個(gè)或者多個(gè)特定生物標(biāo)志物在細(xì)胞懸液樣本上的表達(dá)。

常規(guī)的免疫組化染色都是以病理玻片為載體來(lái)進(jìn)行的，常規(guī)病理玻片上細(xì)胞蛋白標(biāo)記物的表達(dá)是通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)的。通過(guò)對(duì)病理玻片上的樣本加入第一抗體，能夠特異性識(shí)別第一抗體的顯色酶標(biāo)記的第二抗體，再加入相應(yīng)的顯色酶底物，經(jīng)過(guò)顯色酶的催化反應(yīng)，最終通過(guò)產(chǎn)生的顯色產(chǎn)物沉淀，在病理玻片顯示某種特異性生物標(biāo)志物在細(xì)胞中的表達(dá)信號(hào)。