[發(fā)明專利]一種溶菌酶復(fù)合物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010466891.5
• 申請(qǐng)日: 2020-05-28
• 公開（公告）號(hào): CN111567565A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李秋雁;徐志良;張咪;仲倩蕊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇雪豹日化有限公司
• 主分類號(hào): A01N63/50
• 分類號(hào): A01N63/50;A01N43/16;A01P3/00;A01P1/00
• 代理公司: 江蘇英特東華律師事務(wù)所 32229
• 代理人: 邵驊

本發(fā)明公布了一種溶菌酶復(fù)合物，由溶菌酶和羧化殼聚糖進(jìn)行復(fù)配，其特征在于：各組分的質(zhì)量體積濃度（g/L）：溶菌酶1?5，羧化殼聚糖0.1?5；其中溶菌酶和羧化殼聚糖的質(zhì)量比為10：1?10：20。本發(fā)明將溶菌酶和殼聚糖衍生物按照一個(gè)優(yōu)選的比例進(jìn)行復(fù)配，制備所得溶菌酶/羧化殼聚糖復(fù)合物，較溶菌酶或羧化殼聚糖單獨(dú)作為抑菌劑使用時(shí)抑菌率有所提高；優(yōu)選配比的復(fù)合物溶解性、穩(wěn)定性好，解決了溶菌酶穩(wěn)定性差、對(duì)革蘭氏陰性菌抑制效果差的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種溶菌酶復(fù)合物。

背景技術(shù)

溶菌酶是一種天然抗菌蛋白，又稱為胞壁質(zhì)酶或乙酰胞壁質(zhì)肽聚糖水解酶，溶菌酶廣泛分布于自然界，在蛋清、淚液、唾液、血漿、乳汁和組織細(xì)胞中及細(xì)菌和植物的膠乳中都存在溶菌酶。肽聚糖是細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成份，由N-乙酰葡萄糖胺(NAG)、N- 乙酰胞壁酸(NAM)和一種四肽構(gòu)成，兩種糖分子通過β-1,4糖苷鍵交替連接。溶菌酶能有效地水解細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖，由于革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁中肽聚糖含量較高，而革蘭氏陰性菌的肽聚糖含量較低且埋藏在外膜脂多糖層之內(nèi)，阻礙了溶菌酶作用于肽聚糖，因此，溶菌酶對(duì)革蘭氏陽性菌具有很強(qiáng)的殺菌作用，但對(duì)革蘭氏陰性菌幾乎無作用。同時(shí)，溶菌酶是一種堿性蛋白酶，在酸性條件下熱穩(wěn)定性強(qiáng)，但在堿性條件下其活性易被破壞；在干燥、低溫條件下，溶菌酶活性不受影響，可長期儲(chǔ)存，但其水溶液長期存放或反復(fù)凍融都會(huì)降低其活性。

殼聚糖是甲殼素脫乙酰基的產(chǎn)物，是天然多糖中唯一的堿性多糖，無毒、無抗原性、可生物降解，具有抑菌、抗癌、增強(qiáng)免疫等功效，是近年來新興的止血材料，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、食品、生物技術(shù)等領(lǐng)域。殼聚糖只能溶于酸性環(huán)境、抑菌譜較窄，抑菌效果還與其脫乙酰化程度、分子量以及環(huán)境的pH等因素有關(guān)，所以對(duì)殼聚糖進(jìn)行修飾改善殼聚糖的溶解性、提高其抑菌活性和止血愈創(chuàng)功效已成為開發(fā)殼聚糖類衍生物的重要方向。

目前已有很多研究將溶菌酶、殼聚糖作為抑菌成分加入產(chǎn)品中，通過與不同組分復(fù)配來提高它們的抑菌活性和穩(wěn)定性，如專利號(hào)為CN102138570A的中國專利公開了溶菌酶組合抑菌劑，由溶菌酶、甘氨酸、乙二胺四乙酸進(jìn)行復(fù)配組合解決溶菌酶對(duì)革蘭氏陰性菌抑制效果差的問題；專利號(hào)為CN107737024A的中國專利公開了一種含有生物溶菌酶的添加劑組合物，將生物溶菌酶與改性植物膠、EDTA二鈉、去離子水按特定含量組合，保護(hù)生物溶菌酶的活性免受產(chǎn)品中其他成分影響；專利號(hào)為CN107997984A的中國專利公開了一種抗菌肽—?dú)ぞ厶菑?fù)合物、其制備方法及其應(yīng)用，用抗菌肽修飾殼聚糖，提高了其抗菌活性。由于殼聚糖本身含有β-1,4糖苷鍵，溶菌酶能夠降解殼聚糖，簡單將溶菌酶和殼聚糖復(fù)配不能達(dá)到理想效果，甚至?xí)茐捏w系的穩(wěn)定性，所以需要尋找合適的配比，改善溶菌酶和殼聚糖復(fù)配后的抑菌性、穩(wěn)定性等，目前相關(guān)方面的研究還比較少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種一方面可以提高溶菌酶/ 羧化殼聚糖復(fù)合物的穩(wěn)定性，另一方面提高溶菌酶/羧化殼聚糖復(fù)合物的抑菌活性，解決其對(duì)革蘭氏陰性菌抑制效果差的問題的溶菌酶復(fù)合物。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，采用如下技術(shù)方案：

一種溶菌酶復(fù)合物，由溶菌酶和羧化殼聚糖進(jìn)行復(fù)配，其特征在于：各組分的質(zhì)量體積濃度(g/L)：溶菌酶1-5，羧化殼聚糖0.1-5；其中溶菌酶和羧化殼聚糖的質(zhì)量比為 10：1-10：20。該比例的溶菌酶和羧化殼聚糖復(fù)配溶液對(duì)于金黃色葡萄球菌的抑菌效果達(dá)到60.4％以上；對(duì)于白色念珠菌的抑菌效果達(dá)到95.4％以上。該配比還可以有效減緩酶活性的降低。

優(yōu)選的：所述溶菌酶和羧化殼聚糖的質(zhì)量比為10：1-10：1.5。該比例的溶菌酶和羧化殼聚糖復(fù)配溶液對(duì)于金黃色葡萄球菌的抑菌效果達(dá)到98.7％左右；對(duì)于白色念珠菌的抑菌效果達(dá)到100％；對(duì)于大腸桿菌的抑菌效果達(dá)到50％以上。該配比的復(fù)合物溶液37℃放置1個(gè)月后，溶菌酶酶活性下降了14.3％，有效減緩酶活性的降低。

進(jìn)一步的：所述羧化殼聚糖為羧甲基殼聚糖或羧乙基殼聚糖。