[發明專利]一種蟲草菌種保藏專用低溫冷凍保護劑及使用方法

在審

• 申請號: 202010464845.1
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN111394263A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 林群英;鄧春英;楊彝華;孫力軍;侯北偉
• 申請（專利權）人: 中華全國供銷合作總社南京野生植物綜合利用研究所;貴州省生物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/04;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于真菌菌種保藏技術領域，涉及一種蟲草菌種保藏專用低溫冷凍保護劑及使用方法。通過菌種培養，利用光照誘導菌種形成孢子。將收集菌絲至經滅菌的研缽，加入保護劑進行研磨，并制成混懸液。保護劑由兩部分組成，一部分為蟲草營養液，其組成是：葡萄糖10?20 g，蛋白胨4?8 g，酵母浸膏1?2 g，水定容至1000 mL，自然pH。另一部分為甘油。將兩部分分別滅菌，使用前用蟲草營養液配制10%?50%甘油溶液。采用細胞篩進行過濾，收集濾液，分裝至無菌的冷凍管中，密封，置于低溫冷凍保藏。本發明提供的保護劑所保藏的菌種有效期在3年以上，且可直接用于液體菌種的生產，減少繼代次數。

技術領域

本發明屬于真菌菌種保藏技術領域，涉及一種蟲草菌種保藏專用低溫冷凍保護劑及使用方法。

背景技術

中國是世界上最大的食用菌生產國和出口國，食用菌產業已成為繼糧食、油料、果品和蔬菜之后的第五大種植產業，最近兩年我國食用菌總產量近4000萬噸。盡管食用菌規模不斷擴大，但我國食用菌還存在眾多問題，其中最為突出是菌種問題。種源不足、菌種退化嚴重、制種工藝落后等等問題嚴重制約著產業的發展。由于傳統的制種技術是通過固體菌種擴大培養進行的，其培養周期長、轉接種塊用量大，使得出發菌種需要經過多次的轉接擴大才能投入栽培生產，本身的變異風險也迅速加大。菌種質量退化，不但會造成鮮菇口感越來越差，特有的香味減弱，甚至嚴重影響食用菌的產率，導致菇體畸形或失收。

蛹蟲草（Cordyceps militaris）具有很高的營養價值，含豐富的氨基酸和維生素，于2009年被認定為新資源食品。蛹蟲草含有其特征成分蟲草素，已被證實具有顯著的抗腫瘤作用。據中國食用菌協會統計，2015年蛹蟲草全國產量增長高達400%，而2016年的產量受市場影響而略有下降，但其發展勢頭仍然十分強勁，2018年較2017年增長了13.57%。隨著蛹蟲草子實體生產規模的不斷發展，生產模式逐漸穩定，蛹蟲草作為一種新興的食用菌種類已經被市場和廣大消費者接受，并開始受到追捧，栽培企業仍在不斷增加與擴大，社會經濟效益非常顯著。蛹蟲草菌種易退化已被廣泛認同，關于退化的機制也有一定的研究，但仍未找到較好的解決方法。目前，主要是盡量減少繼代次數，降低退化的風險。因此，蛹蟲草菌種的保藏方法是否能滿足生產需要顯得尤為重要。

不少蟲草種類具有極高的利用價值，生物資源菌種保藏問題亟需解決。蟲草屬中除了名貴中藥材冬蟲夏草（Cordyceps sinensis）的藥用價值得到充分的肯定外，現代科學研究表明，蟲草屬其他種類也是極具應用價值的藥食同源的大型真菌，如蟬花、古尼蟲草（C. gunnii）、涼山蟲草（C. liangshanensis）、巴恩斯蟲草(C. barnesis)蟲草等。目前世界上已知的蟲草有500多種，我國的種類有140余種。但由于生長環境隱蔽，采集難度較大，受到種質資源收集等因素的制約，使得目前只有極小比例的種類可以人工培養。一旦獲得蟲草菌種，其保藏條件是影響菌種活力的重要因素。隨著資源日益增多，保藏帶來的工作量亦會隨之增加。由于人手不足，常規轉管繼代的保存方法會出現培養基干涸而導致菌種死亡的問題。

綜上所述，建立一種蟲草專用的保藏技術是發展蟲草產業的重要內容。目前菌種保藏方法主要有：定期繼代轉管法、石蠟保藏法、甘油保藏法、凍干法、液氮超低溫保藏法等。應用最為廣泛是定期繼代轉管法，保藏效果最佳的則是液氮超低溫法。這些方法各有優缺點。目前，也有一些報道是針對蛹蟲草菌種的保藏方法，但未見針對蟲草類真菌菌種保藏的報道。