[發(fā)明專利]產(chǎn)L-乳酸的重組菌株及其構(gòu)建方法和發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010463397.3
• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111500517B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 佟毅;李義;張媛;陳博;王小艷;安泰
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林中糧生化有限公司;中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司;中糧生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/04;C12N15/53;C12P7/56;C12P7/62;C12R1/225
• 代理公司: 北京潤平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 劉依云;喬雪微

1.一種產(chǎn)L-乳酸的重組菌株，其特征在于，該重組菌株由出發(fā)菌株經(jīng)遺傳改造獲得，相比于出發(fā)菌株，所述重組菌株的D-乳酸脫氫酶的活性減弱或失活且L-乳酸脫氫酶的活性增強(qiáng)；

其中，所述重組菌株中的至少部分D-乳酸脫氫酶基因被敲除；

敲除的D-乳酸脫氫酶基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示；

所述重組菌株中含有編碼氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的L-乳酸脫氫酶的基因；

所述出發(fā)菌株是保藏編號為CGMCC No.16834的鼠李糖乳桿菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌株，其中，敲除的D-乳酸脫氫酶基因的序列如SEQ IDNO：16所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌株，其中，所述重組菌株中含有基因序列如SEQ ID NO：14所示的L-乳酸脫氫酶基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌株，其中，所述重組菌株的保藏編號為CGMCCNo.19508。

5.一種構(gòu)建重組菌株的方法，其特征在于，該方法包括：對出發(fā)菌株進(jìn)行遺傳改造以使出發(fā)菌株的D-乳酸脫氫酶的活性減弱或失活并使出發(fā)菌株的L-乳酸脫氫酶的活性增強(qiáng)；

其中，使出發(fā)菌株的D-乳酸脫氫酶的活性減弱或失活的方式為基因敲除；

敲除的D-乳酸脫氫酶基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示；

使出發(fā)菌株的L-乳酸脫氫酶的活性增強(qiáng)的方式為外源引入編碼氨基酸序列如SEQ IDNO：11和/或SEQ ID NO：13所示的L-乳酸脫氫酶的基因；

所述出發(fā)菌株是保藏編號為CGMCC No.16834的鼠李糖乳桿菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，敲除的D-乳酸脫氫酶基因的序列如SEQ ID NO：16所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，使出發(fā)菌株的L-乳酸脫氫酶的活性增強(qiáng)的方式為外源引入基因序列如SEQ ID NO：12和/或SEQ ID NO：14所示的L-乳酸脫氫酶基因。

8.一種發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的方法，其特征在于，該方法包括：將權(quán)利要求1-4中任意一項所述的重組菌株接種至產(chǎn)酸發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵；

或者，按照權(quán)利要求5-7中任意一項所述的方法構(gòu)建重組菌株，并將得到的重組菌株接種至產(chǎn)酸發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵。

9.權(quán)利要求1-4中任意一項所述的重組菌株或權(quán)利要求5-7中任意一項所述的方法在制備L-乳酸或聚L-乳酸中的應(yīng)用。