[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝

在審

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• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111621536A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李珊
• 申請（專利權(quán)）人: 河北圣雪大成制藥有限責任公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K14/315;C12N1/20;C12R1/46
• 代理公司: 北京集智東方知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11578
• 代理人: 吳倩

1.一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：包括以下步驟：乳酸鏈球菌種液經(jīng)一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)后轉(zhuǎn)移到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)；然后通過補糖控制糖濃度，在菌濃增長到一定程度，乳酸鏈球菌素的合成啟動后，在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加一定量的氨基酸前體混合液，發(fā)酵22-26h。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述一級種子培養(yǎng)的具體步驟為：將乳酸鏈球菌種液接種于一級種子罐中培養(yǎng)，接種量0.15-0.25％，料液稀釋5倍于OD600nm下檢測，當吸光值達到0.6以上，pH值6.0-6.5，培養(yǎng)時間8-12h，得到一級種子液；所述二級種子培養(yǎng)的具體步驟為：將上述一級種子液接種于二級種子罐中培養(yǎng)，接種量3-5％，料液稀釋5倍于OD600nm下檢測，當吸光值達到0.6以上，pH值6.0-6.5，培養(yǎng)時間4-8h時移種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)的具體步驟為：將培養(yǎng)好的二級種子液接種于裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中培養(yǎng)，接種量5-8％，培養(yǎng)周期為22-26h，發(fā)酵結(jié)束，即得到乳酸鏈球菌素發(fā)酵液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述一級種子罐和二級種子罐中的培養(yǎng)基成分按重量百分比為：葡萄糖0.5-1.0％，牛骨蛋白胨0.5-1.0％，酵母浸粉0.5-1.0％，KH₂PO₄0.3-0.7％，NaCl 0.1-0.3％，MgSO₄·7H₂O 0.01-0.03％。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分按重量百分比為：葡萄糖1.0-1.5％，酵母浸粉0.5-1.0％，KH₂PO₄0.1-0.3％，NaCl 0.1-0.3％，MgSO₄·7H₂O 0.01-0.03％，玉米漿干粉0.2-0.8％，吐溫-800.1-0.2％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述氨基酸前體混合液成分按重量百分比為：絲氨酸0.01-0.03％、蘇氨酸0.01-0.03％、半胱氨酸0.01-0.03％。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述一級種子培養(yǎng)和二級種子培養(yǎng)的條件均為：不通氣，罐壓0.04±0.05Mpa，培養(yǎng)溫度30±1℃培養(yǎng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件為：不通氣培養(yǎng)，前4h罐壓0.04±0.005Mpa，4h后泄壓0Mpa培養(yǎng)，溫度30±1℃，全程通過調(diào)節(jié)液堿控制pH值的變化范圍為6.0-6.3。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述補糖控制糖濃度的具體步驟為：采用流加法進行補糖，其中：葡萄糖降至0.5％開始補糖，中間控制糖濃度為0.3-0.5％。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：所述發(fā)酵過程中氨基酸前體混合液的添加方式為：在發(fā)酵6-10h后以0.2-0.5％發(fā)酵液體積的速率流加。