[發明專利]一株惡臭假單胞菌X14及其應用方法

有效

• 申請號: 202010461696.3
• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111548967B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 許雋;雷平;邵晨霞;楊祎;葛小鵬;賀月林;唐少軍;靳磊;吳勝蓮
• 申請（專利權）人: 湖南省微生物研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;C12R1/40;C12R1/645
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于微生物技術領域，涉及一株促進羊肚菌菌絲生長的惡臭假單胞菌X14及其應用方法。惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)X14，保藏編號為：CGMCC No.19720。添加本發明菌株X14能夠提高羊肚菌試管種和原種的菌絲生長速率，縮短羊肚菌制種周期，本菌株的發酵條件簡單，應用方便，適合羊肚菌菌種的規模化生產。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，涉及到一株促進羊肚菌菌絲生長的惡臭假單胞菌X14及其應用方法。

背景技術

羊肚菌(Morchella esculenta)在分類學上屬于子囊菌門，盤菌綱，盤菌目，羊肚菌科，羊肚菌屬，因其外表凹陷狀似羊肚而得名。羊肚菌肉質鮮美脆嫩，營養和藥用價值極高，是久負盛名的食補良品，具有增強肌體免疫力、促進副腎皮激素的分泌、降低膽固醇、預防動脈硬化、抗疲勞、抗病毒、抗腫瘤等作用。

羊肚菌市場價格顯著高于常規食用菌品種，近年來羊肚菌栽培進入商業化高速發展階段。2012年全國羊肚菌種植面積僅約3000畝，2017年達到7萬畝，2018年已達14萬畝，2019年約10-12萬畝，相比2018年，栽培面積穩中有降。羊肚菌主要種植范圍由四川、云南、貴州逐漸向河南、河北、湖北、新疆、湖南等地區擴展。由于栽培技術還不完善，羊肚菌人工種植產量不高，市場上供不應求。

覆土是羊肚菌人工栽培中的重要環節，羊肚菌菌絲只有在適宜的土壤環境下才能完成出菇。關于羊肚菌的覆土機理，有研究發現覆土中的微生物，特別是細菌對于原基形成具有重要作用，羊肚菌生長土壤的細菌數量顯著高于非羊肚菌生長土壤。目前土壤細菌與羊肚菌的互作機理仍然不清楚，有待深入研究。菌種制作是羊肚菌人工栽培中首要環節，大部分菇農采用試管種-原種-栽培種傳統擴大培養方法制作羊肚菌菌種，制種周期長，導致生產成本高。

發明內容

本發明的首要目的是提供一株惡臭假單胞菌X14保藏編號為：CGMCC No.19720。該菌具有促進羊肚菌菌絲生長的作用。

本菌株X14是從羊肚菌菌基土壤中分離篩選獲得，在羊肚菌試管種中添加X14菌液，羊肚菌菌絲生長速率提高了23.7-28.8％，在羊肚菌原種中添加X14菌液，羊肚菌菌絲生長速率提高了13.8％。通過生理生化特征試驗與16S rDNA序列分析，初步鑒定菌株X14為惡臭假單胞菌。

本發明的第二個目的是提供惡臭假單胞菌X14的應用。具體是指惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)X14在促進羊肚菌菌絲生長中的應用。

進一步的，所述的惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)X14促進羊肚菌試管種菌絲生長中的應用。

進一步的，把羊肚菌接種在PDA平板培養基中培養，菌絲長滿平皿待用；把X14菌株接種在營養肉湯培養基中，振蕩培養過夜待用；把麥粒浸泡過夜或用開水煮沸，過濾水分晾干后裝入試管，進行高溫高壓滅菌制作成麥粒試管培養基；用打孔器接種羊肚菌圓形菌餅于麥粒試管種，同時接種X14菌液，靜置培養。

進一步的，把羊肚菌接種在PDA平板培養基中，在16-20℃培養5-7d，菌絲長滿平皿待用；把X14菌株接種在營養肉湯培養基中，在25-28℃振蕩培養14-18h待用；把麥粒浸泡過夜，用開水煮沸，過濾水分晾干后裝入20x 200mm試管，麥粒裝量18-22g，進行高溫高壓滅菌制作成麥粒試管培養基；用打孔器接種直徑為10mm的羊肚菌圓形菌餅1-2個于麥粒培養基上，同時接種1-2ml的X14菌液，16-20℃靜置培養。