[發明專利]一種基于RT-PCR及毛細電泳的同步檢測19種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202010461604.1
• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111455115A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 吳勇;曾縣平;余道福;何秀;才必華;孔咪咪;余丁
• 申請（專利權）人: 寧波海爾施基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 余姚德盛專利代理事務所(普通合伙) 33239
• 代理人: 吳曉微

本發明公開了一種基于RT?PCR及毛細電泳的同步檢測19種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒及檢測方法，所述試劑盒包括ME預混液、RT?PCR酶液、ME陽性對照、陰性對照、反應內參(IC)和無核酸酶水。本發明采用一步法RT?PCR同時對19種腦炎腦膜炎病原體和3個內參(人DNA內參、人RNA內參和反應內參)的特異性基因核酸序列進行擴增，采用毛細電泳分離不同長度的擴增產物，得到病原體的檢測結果。本發明可同步對19種腦炎腦膜炎病原體進行檢測，并同時提供交叉感染信息，具有靈敏度高、特異性強、重復性好、快速準確的優勢。

技術領域

本發明涉及病原體核酸檢測技術領域，具體涉及一種基于RT-PCR及毛細電泳的同步檢測19種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒及檢測方法。

背景技術

腦膜炎(Meningitis)是指包裹大腦和脊髓的保護薄膜急性炎癥，而這些保護薄膜被統稱為腦膜。腦膜發炎可由病毒、細菌或其他微生物的感染所引致，而在少數情況下或可由某種藥物引發。腦膜炎由于其發炎位置接近大腦和脊髓，因此可以致命；所以此病為內科急診的一種。

腦膜炎最常見的癥狀是頭痛和頸部僵直，伴隨發燒、精神錯亂或意識改變、嘔吐、畏光(恐光癥)或響亮的聲音(聲音恐懼癥)。兒童通常只會出現非特異性的癥狀，如易怒和精神萎靡。按照病因可分為：細菌性腦膜炎、病毒性腦膜炎、真菌性腦膜炎、寄生性腦膜炎和非感染性腦膜炎。

細菌性腦膜炎是一種發病率低，但是癥狀非常嚴重，可能致死的疾病。腦膜炎奈氏菌(Neisseria meningitidis)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)和流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)是引起細菌性腦膜炎的常見的3種病原體。肺炎鏈球菌主要感染2歲以下的兒童和免疫低下/缺陷的成年人，肺炎球菌性腦膜炎是細菌性腦膜炎中最嚴重的，患者通常會有神經損傷，例如耳聾，腦損傷。流行性腦脊髓膜炎是由腦膜炎奈氏菌引起的，患者可能會有腦損傷等其他后遺癥。嗜血桿菌腦膜炎也是發病率很高的疾病，但是隨著b型流感嗜血桿菌疫苗的使用，發病率已經大大降低。其他類型的細菌性腦膜炎的細菌還有李斯特氏菌腦膜炎(Listeria monocytogenes meningitis)、大腸桿菌腦膜炎(Escherichia coli meningitis)、結核分枝桿菌腦膜炎(Mycobacterium tuberculosismeningitis)。

病毒性腦膜炎(Viral meningitis)通常是由腸道病毒引起的，病毒通過口傳入身體中，并傳染到腦及周邊組織，并在那里繁殖。其他病毒包括水痘帶狀皰疹病毒、單純性皰疹病毒、腮腺炎病毒等等。

引起真菌性腦膜炎最常見的病原體是新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)，盡管是可治愈的，但是感染過新型隱球菌的人中接近一半的人可能復發。

腦炎(encephalitis)是指腦實質受病原體侵襲導致的炎癥性病變。由于發病原因復雜、診斷難度大，加之起病急、病情兇險，如果治療不及時，會對身體健康和生命安全造成嚴重危害，尤其是嬰幼兒，影響其生長發育。腦炎的感染病原體繁多，通常由病毒感染造成，也可由細菌、霉菌、螺旋體、立克次氏體、寄生蟲等感染引起，有的可能是變態反應性疾病，如急性播散性腦脊髓炎。但是60％的腦炎都是未確診的，這是個值得探索的領域。最常見的致病菌有腦膜炎奈瑟氏菌、肺炎鏈球菌、b型流感嗜血桿菌、葡萄球菌、結核分枝桿菌、李斯特氏菌、大腸桿菌等。最常見的病毒感染有腸道病毒、單純性皰疹病毒、腮腺炎病毒、巨細胞病毒、日本腦炎病毒、柯薩奇病毒和蟲媒病毒等。

臨床常用的腦炎腦膜炎檢測方法，包括腦脊液檢查、影像學檢查、分子生物學法、二代測序技術等。具體如下：

(1)腦脊液檢查