[發明專利]一種測定余甘子氨基酸組成及含量的方法

在審

• 申請號: 202010461271.2
• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111638279A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 袁建民;何璐;楊曉瓊;孔維喜;許智萍;趙瓊玲;瞿文林;雷虓;壩德昆
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院熱區生態農業研究所;云南昌潤生態農業科技開發有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N1/44
• 代理公司: 北京睿博行遠知識產權代理有限公司 11297
• 代理人: 龔家驊

1.一種測定余甘子氨基酸組成及含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1、余甘子果實干粉的制備

選取健康完好的余甘子果實，洗凈，去核，烘干，進行粉碎，過篩，得到余甘子果實干粉；

2、稱取樣品

精確稱取所述的余甘子果實干粉100mg-200mg，采用297mm×40mm大小的紙槽將樣品送至聚四氟乙烯微波水解罐底部，

3、樣品水解鹽酸的添加

上述樣品中精確加入6mol/L HCl 8ml，輕輕搖勻，靜置，吹入氮氣，約20-30s，氮氣壓力宜在0.1左右，以免吹出液體，擰緊消解罐，確保完全密封，同時將上述樣品置于常規水解管中，加入6mol/L HCl 8ml，輕輕搖勻，靜置，同樣吹入氮氣，封管，置于恒溫烘箱中110℃條件下水解22h-24h；

4、微波水解程序設定

按照設定好的微波水解程序進行樣品水解，消解完畢后，冷卻至室溫，混勻，開管，定容至50ml，0.45μm濾膜過濾；

5、水解液趕酸

吸取水解液0.5ml置于5mlEP管中，溫度60℃，置于氮吹儀插孔中趕酸，距離液面0.5cm，以不吹出液體為宜，蒸發至干，必要時加少許去離子水，重復蒸干1-2次；

6、上機樣品制備

上述樣品中加入1-2ml樣品稀釋液pH為2.2，使氨基酸濃度為50-200nmol/L為宜，震蕩混勻，用0.22μm濾膜過濾，供上機測定；

7、標準曲線的制作

將17種氨基酸標樣，即2.5umol/L，胱氨酸減半，稀釋25倍至100nmol/L供上機測定，分別進樣5ul、10ul、20ul、50ul，制作標準曲線；

8、樣品檢測

將上述樣品依次進樣50ul，測定峰面積，根據標準曲線計算余甘子干粉中氨基酸組成及含量；

9、加標回收實驗

取已知含量的余甘子果實干粉樣品，精密加入一定量的混合氨基酸標準品溶液，測定其回收率；

10、重復性實驗

分別吸取樣品1、2、3各50ul，利用氨基酸分析儀進行分析，計算測定結果。