[發明專利]復方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的檢測方法

有效

• 申請號: 202010459322.8
• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111443151B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 徐大星;吳方也;何翠翠;關鳳
• 申請（專利權）人: 費森尤斯卡比華瑞制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 曹祖良;涂三民

1.一種復方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的檢測方法，其特征是，所述復方氨基酸注射液中不含半胱氨酸、含有胱氨酸或乙酰半胱氨酸，該檢測方法包括以下步驟：

步驟一、半胱氨酸加水稀釋成濃度為0.0639~20.04mg/L后作為對照品溶液；

步驟二、復方氨基酸注射液加水進行稀釋后作為供試品溶液，復方氨基酸注射液稀釋倍數為10倍；

步驟三、采用濃度為0.8~2.6?mmol/L的N-(1-芘基)馬來酰亞胺乙腈溶液對所述對照品溶液和供試品溶液中半胱氨酸分別進行衍生，對照品溶液以及供試品溶液與N-(1-芘基)馬來酰亞胺乙腈溶液反應的體積比均為1：3，衍生完成后加入鹽酸溶液渦旋混勻；

所述鹽酸溶液的濃度為0.2?mol/L，鹽酸溶液體積與衍生化后對照品溶液的體積比為1：10，鹽酸溶液體積與衍生化后供試品溶液的體積比為1：10；

步驟四、確定以下色譜條件：

色譜柱采用250×4.6mm、5mm的十八烷基硅烷鍵合硅膠C18色譜柱；

流動相：流動相A為10mM的磷酸二氫鈉緩沖液，流動相B為乙腈；

線性梯度洗脫條件為：0~8分鐘：60%~56%流動相A、40%~44%流動相B；9~17分鐘：10%流動相A、90%流動相B；18分鐘以后：60%~56%流動相A、40%~44%流動相B；

流速設定為0.9~1.1mL/min；

柱溫設定為33~37℃；

檢測器：熒光檢測器；

激發波長設定為330nm；

發射波長設定為376nm；

進樣器溫度設定為4℃；

進樣體積設定為10μL；

步驟五、將所述步驟三得到的衍生后的對照品溶液和供試品溶液采用步驟四中條件進行高效液相色譜分析，根據衍生后的對照品溶液和供試品溶液的液相色譜圖，采用外標法得到復方氨基酸注射液中半胱氨酸的含量；

步驟四中，準確稱取磷酸二氫鈉1.56g至1000mL水中，溶解后，加磷酸調pH至2.80~3.20，用0.45μm濾膜過濾，得到所述的磷酸二氫鈉緩沖液。

2.根據權利要求1所述的復方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的檢測方法，其特征是：步驟一中，半胱氨酸加水稀釋成濃度為20.04mg/L后作為對照品溶液。

3.根據權利要求1所述的復方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的檢測方法，其特征是：步驟三中，衍生時間為10min~30min。

4.根據權利要求1所述的復方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的檢測方法，其特征是：步驟四中，所用柱溫為35℃。

5.根據權利要求1所述的復方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的檢測方法，其特征是：步驟四中，所用流速為1.0mL/min。

6.根據權利要求1所述的復方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的檢測方法，其特征是：步驟四中，所述線性梯度洗脫條件為：0~8分鐘：58%流動相A、42%流動相B；9~17分鐘：10%流動相A、90%流動相B；18分鐘以后：58%流動相A、42%流動相B。