[發(fā)明專利]檢測新冠病毒2019-nCoV以及甲型、乙型流感病毒的組合物及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010450960.3
• 申請日: 2020-05-25
• 公開（公告）號: CN111719016A
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張仁利;黃亞蘭;雷湘華;郭永超;陳瑩瑩;馬玉馨
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市疾病預(yù)防控制中心;深圳聯(lián)合醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 黃志云

本申請涉及分子生物學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種檢測新冠病毒2019?nCoV以及甲型、乙型流感病毒的組合物；該組合物能夠同時(shí)檢測上述三種不同的病毒，檢測靈敏度高、重復(fù)性好、假陰性及假陽性低，能夠有效鑒別新冠病毒感染和普通病毒性感冒引起的呼吸道感染，同時(shí)針對新冠病毒2019?nCoV的特異性區(qū)域設(shè)計(jì)了雙檢測靶點(diǎn)，降低了單一靶點(diǎn)對新冠病毒2019?nCoV的漏檢情況，從而實(shí)現(xiàn)對患者的精準(zhǔn)診斷及后續(xù)的精準(zhǔn)治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請屬于分子生物學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測新冠病毒 2019-nCoV以及甲型、乙型流感病毒的組合物、一種檢測新冠病毒2019-nCoV 以及甲型、乙型流感病毒的試劑盒及一種利用所述的檢測新冠病毒2019-nCoV 以及甲型、乙型流感病毒的試劑盒進(jìn)行檢測的方法。

背景技術(shù)

2019年12月以來，經(jīng)過持續(xù)開展流感及相關(guān)疾病監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)多起病毒性肺炎病例，均診斷為病毒性肺炎/肺部感染。隨后研究發(fā)現(xiàn)，此前的肺炎/肺部感染均是由一種新型的冠狀病毒感染引起。2020年1月12日被世界衛(wèi)生組織命名為2019新型冠狀病毒(2019-nCoV)。另外，當(dāng)下正是各種甲型流感病毒、乙型流感病毒相關(guān)病毒感染致病高發(fā)期，其臨床表現(xiàn)與新型冠狀病毒肺炎相似，難以通過臨床表現(xiàn)、胸部影像學(xué)鑒別。而且目前研究顯示，新冠病毒感染者和非感染者，均有合并感染的現(xiàn)象。如果發(fā)熱病例不能得到及時(shí)的快速精準(zhǔn)診斷，流感病例很有可能被視同新型冠狀病毒感染對待、患者合并感染多、交叉感染隱患大、給新型冠狀病毒的防控帶來極為不利影響。因此，臨床診斷手段需要改進(jìn)，應(yīng)高度重視除新冠病毒外的其他呼吸道常見病原體篩查。在收診新冠肺炎患者或疑似患者過程中，需要評估其他感染的可能性，以便及時(shí)進(jìn)行臨床分類、隔離和治療。

目前，國內(nèi)外對病毒感染的診斷方法，主要是血清學(xué)試驗(yàn)、病毒培養(yǎng)和PCR。其中，血清學(xué)試驗(yàn)、組織培養(yǎng)，具有靈敏度低、免疫交叉反應(yīng)以及周期長等缺點(diǎn)；常規(guī)的多重實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是將PCR技術(shù)和多色熒光標(biāo)記探針相結(jié)合的技術(shù)，可以在同一個(gè)PCR反應(yīng)管中對多個(gè)病毒同時(shí)進(jìn)行快速擴(kuò)增，大大提高了檢測效率；另外各色熒光的增長信號與相應(yīng)PCR產(chǎn)物的增長量成等比關(guān)系，并被自動化熒光檢測儀收集，最后可通過分析熒光增長曲線達(dá)到檢測病原體類型的目的，具有極高的靈敏度和特異性，能夠快速、準(zhǔn)確的得到檢測結(jié)果。

針對新型冠狀病毒和甲型流感病毒、乙型流感病毒的檢測，一方面，目前采用單指標(biāo)檢測，需要進(jìn)行多次檢測才能完成病原體的檢測，在面對大規(guī)模樣本檢測時(shí)，無疑會耗費(fèi)大量的人力物力，延長診斷時(shí)間；另一方面，新型冠狀病毒歸屬為新型的SARS變異病毒，目前基于RT-qPCR檢測技術(shù)的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒其引物探針均是針對單一的病原核酸序靶位點(diǎn)都設(shè)計(jì)的。眾所周知，病毒的核酸序列變異程度高，其單堿基突變的頻率遠(yuǎn)高于其他病原體。因此，針對新型冠狀病毒的核酸檢測，單一靶位點(diǎn)容易產(chǎn)生由于突變導(dǎo)致假陰性檢測結(jié)果，造成漏檢，導(dǎo)致檢測不及時(shí)，影響后續(xù)的治療情況。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的目的在于提供一種檢測新冠病毒2019-nCoV以及甲型、乙型流感病毒的組合物及應(yīng)用，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中無法同時(shí)、準(zhǔn)確檢測新型冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒的組合物且檢測假陽性率較高的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述申請目的，本申請采用的技術(shù)方案如下：

第一方面，本申請?zhí)峁┮环N檢測新冠病毒2019-nCoV以及甲型、乙型流感病毒的組合物，所述組合物包括：

用于檢測新冠病毒2019-nCoV ORF1ab靶基因的第一上游引物SEQ ID No.1、第一下游引物SEQ ID No.2和第一探針序列SEQ ID No.3；

用于檢測新冠病毒2019-nCoV ORF1ab靶基因的第二上游引物SEQ ID No.4、第二下游引物SEQ ID No.5和第二探針序列SEQ ID No.6；

用于檢測甲型流感病毒的第三上游引物SEQ ID No.7、第三下游引物SEQ ID No.8和第三探針序列SEQ ID No.9；