[發明專利]一種用于五種石斑魚的分子鑒別引物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202010450619.8
• 申請日: 2020-05-25
• 公開（公告）號: CN111607651B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 楊敏;王慶;秦啟偉;王雨欣;王黎
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

1.一種鑒別五種石斑魚的方法，其特征在于，以待測樣品的基因組DNA為模板，利用核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示的引物進行PCR擴增，回收PCR擴增產物后酶切，將酶切產物電泳，根據電泳結果判定待測樣品的石斑魚類型；所述五種石斑魚為云龍雜交斑、虎龍雜交斑、紅龍雜交斑、赤點石斑魚和斜帶石斑魚；

所述SEQ ID NO:1的核苷酸序列為TCGCCTGTTTATCAAAAACATCGC，所述SEQ ID NO:2的核苷酸序列為TCCGGTCTGAACTCAGATCACGTA；

所述酶切所用的內切酶為內切酶MluC I、內切酶BsrD I和內切酶Hinf I；

所述根據電泳結果判定待測樣品的石斑魚類型的方法為：當用內切酶MluC I和BsrD I進行雙酶切時，如待測樣品電泳圖譜顯示出2條大小分別為215～225bp和175～185bp的條帶，則鑒定為云龍雜交斑；如待測樣品電泳圖譜顯示出1條大小為215～225bp的條帶，則鑒定為虎龍雜交斑；如待測樣品電泳圖譜顯示出2條大小分別為255～265bp和175～185bp的條帶，則鑒定為紅龍雜交斑；當用內切酶BsrD I進行酶切時，如待測樣品電泳圖譜顯示出1條大小為645～655bp的條帶，則鑒定為赤點石斑魚；如待測樣品電泳圖譜顯示出1條大小為435～455bp的條帶，則鑒定為虎龍雜交斑；當用內切酶Hinf I進行酶切時，如待測樣品電泳圖譜顯示出1條大小為645～655bp的條帶，則鑒定為虎龍雜交斑；如待測樣品電泳圖譜顯示出2條大小分別為295～305bp和345～355bp的條帶，則鑒定為斜帶石斑魚。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的體系為：95～105ng模板DNA、45～55μL Premix Taq、3.5～4.5μL上游引物、3 .5～4 .5μL下游引物、去離子水補齊至100μL。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序為：所述PCR擴增的程序為：95℃預變性5min；95℃變性30s，52～58℃退火30s，72℃延伸1min，共38個循環；72℃延伸5min；4℃保存。

4.一種用于鑒別五種石斑魚的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物和權利要求1中酶切所用的內切酶；所述五種石斑魚為云龍雜交斑、虎龍雜交斑、紅龍雜交斑、赤點石斑魚和斜帶石斑魚。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR擴增試劑。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，判定待測樣品的石斑魚類型的方法為權利要求1所述的方法。