[發(fā)明專利]一種柔毛淫羊藿未成熟胚組培快繁方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010439760.8 | 申請日： | 2020-05-22 |
| 公開（公告）號： | CN111480579A | 公開（公告）日： | 2020-08-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張燕君;于淑霞;黃天悅;于東悅;王蘭香;楊路路 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院武漢植物園 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430074 湖北省武*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 柔毛 淫羊藿 未成熟 胚組培快繁 方法 | ||
1.一種柔毛淫羊藿未成熟胚組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)新鮮種莢低溫冷藏培養(yǎng)：從柔毛淫羊藿植株上摘取新鮮飽滿未成熟裂開的綠色果序，將果序放入4℃恒溫冰箱中冷藏培養(yǎng)3周；
(2)種莢消毒：將冷藏后的果序用84消毒液以1：200濃度清洗，置于震蕩箱中，120rpm震蕩0.5h，去除其表面附著的灰塵，清水沖洗除去消毒液；移入超凈工作臺，然后用75％的酒精溶液震蕩消毒30s，無菌水沖洗2遍，將種子置于0.1％質(zhì)量濃度的HgCl2溶液中，120rpm震蕩消毒10min，取出用無菌水漂洗3-4次除去殘留的HgCl2溶液；最后置于滅過菌的濾紙除去殘留的水分備用；
(3)誘導(dǎo)未成熟胚生成愈傷組織：在超凈工作臺上將消毒后的種莢用已滅菌的鑷子與解剖針輕輕撕開，取出種子，撕去種子白色種膜，配合使用解剖刀取出種子未成熟胚，將取出的未成熟胚沿長軸方向用解剖刀輕輕劃傷1-2道，形成創(chuàng)口，將創(chuàng)口向下輕貼于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基a上；在光強1000-1500lux，14h/天光照進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24-25℃條件下；每三周更換一次培養(yǎng)基，所換培養(yǎng)基配方與原培養(yǎng)基一致，誘導(dǎo)生成愈傷組織；待初步生成愈傷組織后，轉(zhuǎn)接愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基b上，同等光照和溫度條件，促進(jìn)愈傷組織加速形成；
(4)誘導(dǎo)愈傷組織分化出不定芽或叢生芽：誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)接到芽分化培養(yǎng)基上，在光強1500-2500lux，14h/天光照進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24-25℃條件下，誘導(dǎo)不定芽的形成；
芽的增殖培養(yǎng)：將1-3個芽體接種到芽增殖培養(yǎng)基，進(jìn)行繼代培養(yǎng)，在光強1500-2500lux，14h/天光照進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24-25℃條件下，誘導(dǎo)形成叢芽；
(5)誘導(dǎo)芽體形成須根：無菌條件下切取單個芽體，接種于生根培養(yǎng)基，在光強1500-2500lux，14h/天光照進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24-25℃條件下，形成白色須根；
(6)煉苗、育苗：挑選長勢良好，根系相對發(fā)達(dá)的組培苗，在煉苗準(zhǔn)備室取下組培瓶的蓋子，在光強1500-2500lux，14h/天光照進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24-25℃，空氣濕度60％-80％條件下，煉苗2-3天；洗凈培養(yǎng)基，栽種到田園土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝2：1：2：1混合后的基質(zhì)中，蔭棚煉苗30-60天；煉苗結(jié)束后移栽至育苗圃，以每株距12-16cm進(jìn)行定植，覆土壓實后澆足水，與此同時架設(shè)遮陽率為60％-70％的遮陽網(wǎng)，并注意防蟲、防旱澇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔毛淫羊藿未成熟胚組培快繁方法，其特征在于，
步驟(3)所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基a為：MS 4.74g/L+6-BA 1.0-2.0mL/L+NAA 0.05-0.1mL/L+TDZ 0.1-0.2mL/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；
所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基b為：MS 4.74g/L+6-BA 1.5-2.0mL/L+NAA 0.05-0.2mL/L+TDZ 0.2-0.4mL/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔毛淫羊藿未成熟胚組培快繁方法，其特征在于，
步驟(4)所述的芽分化培養(yǎng)基為：MS 4.74g/L+6-BA 1.0-2.0mL/L+NAA 1.0-2.0mL/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5；
所述的芽增殖培養(yǎng)基為：MS 4.74g/L+6-BA 1.5-2.0mL/L+NAA1.5-2.0mL/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔毛淫羊藿未成熟胚組培快繁方法，其特征在于，
步驟(5)所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS 4.74g/L+6-BA 1.0-2.0mL/L+NAA 1.0-2.0mL/L+活性炭0.1-0.2g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH調(diào)節(jié)至6.5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柔毛淫羊藿未成熟胚組培快繁方法，其特征在于，
步驟(6)移栽前對苗圃土壤噴灑百菌清按1：1000進(jìn)行消毒。
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