[發明專利]一種箭葉淫羊藿葉柄組培快繁方法

有效

• 申請號: 202010439346.7
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111512964B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 張燕君;黃天悅;于淑霞;梁瓊;于東悅;王蘭香
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種箭葉淫羊藿葉柄組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)葉柄消毒：葉柄采集健康無病害的箭葉淫羊藿植株，截成2-2.5cm小段，將外植體材料置于1:800的百菌清可濕性粉劑水溶液中浸泡15分鐘，然后撈出葉柄移至500ml的大燒杯中蓋上紗布放于自來水下沖洗1小時后瀝干，最后轉入超凈工作臺中用75％的酒精溶液消毒25-35s，期間不斷用滅過菌的鑷子輕輕攪拌，取出用無菌水漂洗3-4次除去殘留的酒精，接著用0.1％升汞消毒8分鐘，無菌水漂洗3-4次，然后置于滅過菌的濾紙上除去殘留的水分備用；

(2)誘導外植體生成愈傷組織：在超凈臺中將消過毒的葉柄用滅過菌的解剖刀切去兩端充分消毒創口，切成1.5-2cm莖段，將莖段用解剖刀沿葉柄縱向劃傷2-3處創口，然后將創口輕貼于愈傷組織誘導培養基；在光強1000-2000lux，12h/天光照條件下進行培養，培養溫度22-26℃；每25天更換一次培養基，所換的繼代培養基配方與原培養基一致，進行愈傷組織的增殖；

(3)誘導愈傷組織分化出不定芽或叢生芽：將誘導產生的愈傷組織轉接到不定芽誘導培養基上，在光強1500-3000lux，12h/天光照條件下進行培養，培養溫度22-26℃，約20天可觀察到誘導不定芽的形成；

芽的增殖培養：切取單個不定芽接種到叢生芽增殖培養基中，在光強1500-3000lux，12h/天光照條件下進行培養，培養溫度22-26℃，誘導形成叢生芽；

(4)誘導芽體形成須根：無菌條件下切取單個芽體，接種于生根培養基，在光強1500-3000lux，12h/天光照條件下進行培養，培養溫度22-26℃，25天之后即可形成白色須根；

(5)煉苗、育苗：挑選長勢良好，根系相對發達的組培苗，在煉苗準備室，揭去組培瓶的蓋子，在光強1500-3000lux，12h/天光照條件下進行培養，培養溫度22-26℃，空氣濕度65％-80％條件下，煉苗5-7天；洗凈培養基，栽種到田園土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝3:1:2:2混合后的基質中，蔭棚煉苗30-60天；煉苗結束后移栽至育苗圃，移栽前對苗圃土壤進行消毒，施適量的有機肥后耙平，以每株距18-25cm進行定植，覆土壓實后澆足水，與此同時架設遮陽率為60％-70％的遮陽網，并注意防蟲、防旱澇；

步驟(2)所述的愈傷組織誘導培養基為：MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.05-0.1mg/L+ZT 0.1-0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調節至6.5；

步驟(3)所述的不定芽誘導培養基為：MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調節至6.5；

步驟(3)所述的叢生芽增殖培養基為：MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+IBA 0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調節至6.5；

步驟(4)所述的生根培養基為：1/2MS 4.74g/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+IBA 0.5-1.0mg/L+活性炭0.4-0.6g/L+蔗糖30g/L+卡拉膠7.5g/L，pH調節至6.5。