[發明專利]靶向CD45的抗體藥物偶聯物及其制備和應用

有效

• 申請號: 202010438614.3
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111617261B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 盛劍鵬
• 申請（專利權）人: 乾元康安（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68;A61K45/00;A61P35/00;A61P37/06;A61P31/18;A61P7/00
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙) 32267
• 代理人: 石磊

1.?靶向CD45的抗體藥物偶聯物，其特征在于，所述抗體藥物偶聯物為CD45?Ab-DTA重組蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

2.包括如權利要求1所述的靶向CD45的抗體藥物偶聯物的藥物組合物。

3.?表達如權利要求1所述的靶向CD45的抗體藥物偶聯物的生產載體，其特征在于，所述生產載體包括編碼以下部分氨基酸的核酸序列：靶向CD45抗體輕鏈、靶向CD45抗體重鏈、白喉毒素、白喉毒素與重鏈之間由Furin蛋白剪切酶識別位點的氨基酸以及6?X?His；

所述生產載體為pTrioz-CD45?Ab-Furin-DTA-6?X?His，其序列為SEQ?ID?NO.?2。

4.構建如權利要求3所述的生產載體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)以pTrioz空白質粒為模板，利用序列如SEQ?ID?NO.4所示的正向引物和序列如SEQID?NO.5所示的反向引物進行PCR，擴增出序列如SEQ?ID?NO.6所示的基因片段IgHC；

(2)?以pIRES-proHB?EGF?WT質粒為模板，利用序列如SEQ?ID?NO.7所示的正向引物和序列如SEQ?ID?NO.8所示的反向引物進行PCR，擴增出序列如SEQ?ID?NO.9所示的基因片段DTA；

(3)?以步驟（1）和（2）得到的基因片段IgHC與DTA為模板，利用序列如SEQ?ID?NO.4所示的正向引物和序列如SEQ?ID?NO.8所示的反向引物進行Overlap?PCR得到序列如SEQ?IDNO.10所示的融合基因片段IgHC-Furin-DTA-6Xhis；

(4)?將目的基因片段IgHC-Furin-DTA-6XHis利用酶切位點NheI、AvrII克隆至載體pTrioz，得到載體pTrioz-Furin-DTA-6?X?His，如?SEQ?ID?NO.1所示；

(5)?合成如SEQ?ID?NO.11所示序列CD45?Ab輕鏈；以合成產物為模板，利用序列如SEQID?NO.12所示的正向引物和序列如SEQ?ID?NO.13所示的反向引物進行PCR，擴增出序列如SEQ?ID?NO.14所示的基因片段CD45?Ab?L；將PCR產物利用酶切位點NcoI、BsiWI克隆至載體pTrioz-Furin-DTA-6?X?His，得到載體pTrioz-L-Furin-DTA-6?X?His,如?SEQ?ID?NO.15所示；

(6)?合成如SEQ?ID?NO.16所示序列CD45?Ab重鏈；以合成產物為模板，利用序列如SEQID?NO.17所示的正向引物和序列如SEQ?ID?NO.18所示的反向引物進行PCR，擴增出序列如SEQ?ID?NO.19所示的基因片段CD45?Ab?H；將PCR產物利用酶切位點NheI、EcoRV克隆至載體pTrioz-L-Furin-DTA-6?X?His，得到生產載體pTrioz-CD45?Ab-Furin-DTA-6?X?His,如SEQ?ID?NO.?2所示。

5.?利用如權利要求4所述的生產載體來制備CD45?Ab-DTA重組蛋白的方法，其特征在于，所述CD45?Ab-DTA重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，所述方法包括以下步驟：

(1)?培養TR?細胞；

(2)?將pTrioz-CD45?Ab-Furin-DTA-6?X?His生產載體轉染至TR?細胞；

(3)?培養轉染后的TR?細胞并收取CD45?Ab?DTA重組蛋白。

6.如權利要求1所述的靶向CD45的抗體藥物偶聯物在制備用于清除正常、病變、癌變的免疫細胞方面的藥物、制備治療血液系統疾病方面的藥物、制備輔助自體、異體骨髓移植方面的藥物、制備治療免疫系統疾病方面的藥物中的應用；所述免疫系統疾病包括但不限于艾滋病。